胰島素是治療糖尿病的特效藥，長期以來只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺中提取，100kg胰腺只能提取4～5g的胰島素，其產(chǎn)量之低和價(jià)格之高可想而知。微生物生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。若將生物合成相應(yīng)藥物成分的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞內(nèi)，讓它們產(chǎn)生相應(yīng)的藥物，不但能解決產(chǎn)量問題，還能大大降低生產(chǎn)成本。如圖為利用基因工程生產(chǎn)胰島素流程圖，請回答下列問題：
（1）目的基因克隆酶切過程和質(zhì)粒提取、酶切過程都需要一種工具是

限制性核酸內(nèi)切酶

限制性核酸內(nèi)切酶

，為確保質(zhì)粒與克隆基因能正確連接，需要

用能獲得相同黏性末端的限制酶處理質(zhì)粒和目的基因（或用兩種不同的限制酶處理質(zhì)粒和目的基因）

用能獲得相同黏性末端的限制酶處理質(zhì)粒和目的基因（或用兩種不同的限制酶處理質(zhì)粒和目的基因）

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（2）基因工程生產(chǎn)胰島素轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞通常是大腸桿菌，這是因?yàn)榇竽c桿菌線

繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少（生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)）

繁殖快、單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對較少（生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)）

，大腸桿菌細(xì)胞最常用的轉(zhuǎn)化方法是：首先用

鈣離子

鈣離子

處理，使細(xì)胞處于

感受

感受

態(tài)，再將

重組表達(dá)載體DNA分子

重組表達(dá)載體DNA分子

溶于緩沖液中與之混合，完成轉(zhuǎn)化過程。
（3）誘導(dǎo)表達(dá)過程中，首先用

分子雜交

分子雜交

技術(shù)檢查是否形成了

mRNA

mRNA

，其次要檢測是否合成了

胰島素

胰島素

，所用的方法為

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

。
（4）從大腸桿菌體內(nèi)獲得的蛋白質(zhì)必須經(jīng)過分離純化，這是因?yàn)?!--BA-->

大腸桿菌體內(nèi)不只是合成胰島素一種蛋白質(zhì)

大腸桿菌體內(nèi)不只是合成胰島素一種蛋白質(zhì)

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