如圖是將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)爰?xì)菌B細(xì)胞內(nèi)制造“工程菌”示意圖，所用載體為質(zhì)粒A．已知細(xì)菌B細(xì)胞內(nèi)不含質(zhì)粒A，也不含質(zhì)粒A上的基因，質(zhì)粒A導(dǎo)入細(xì)菌B后，其上的基因能得到表達(dá)，根據(jù)圖示所給信息回答下列問(wèn)題：

（1）將目的基因和質(zhì)粒結(jié)合形成重組質(zhì)粒時(shí)，用同一種限制性內(nèi)切酶分別切割目的基因和質(zhì)粒，露出相同的黏性末端，將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的切口處再加入適量的

DNA連接酶

DNA連接酶

，使質(zhì)粒與目的基因結(jié)合成重組質(zhì)粒。
（2）目前把重組質(zhì)粒導(dǎo)入細(xì)菌細(xì)胞時(shí)，效率還不高；導(dǎo)入完成后得到的細(xì)菌，實(shí)際上有的根本沒(méi)有導(dǎo)入質(zhì)粒；有的導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A；只有少數(shù)導(dǎo)入的是重組質(zhì)粒。此處可以通過(guò)如下步驟來(lái)鑒別得到的細(xì)菌是否導(dǎo)入了質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒：
將得到的細(xì)菌涂抹在一個(gè)含有

氨芐青霉素

氨芐青霉素

的培養(yǎng)基上，能夠生長(zhǎng)的就是導(dǎo)入質(zhì)粒A或重組質(zhì)粒的，反之則沒(méi)有。此過(guò)程中體現(xiàn)了質(zhì)粒作為運(yùn)載體必須具備的兩個(gè)條件

具有標(biāo)記基因

具有標(biāo)記基因

、

能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定的保存

能在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并穩(wěn)定的保存

。
（3）若進(jìn)一步鑒定證明細(xì)菌中導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒A還是重組質(zhì)粒，將得到的細(xì)菌涂抹在一個(gè)含有

四環(huán)素

四環(huán)素

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，若細(xì)菌

能生長(zhǎng)

能生長(zhǎng)

，則導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒。如果利用DNA分子雜交原理來(lái)證明此過(guò)程，應(yīng)該用

放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的生長(zhǎng)激素基因

放射性同位素（或熒光分子）標(biāo)記的生長(zhǎng)激素基因

作為探針。
（4）使體外重組的DNA分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞內(nèi)，主要是借鑒

細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞

細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞

的途徑。
（5）目的基因表達(dá)成功后，“工程菌”明顯不同于細(xì)菌D．從變異的來(lái)源看，此變異屬于

基因重組

基因重組

。導(dǎo)入細(xì)菌B細(xì)胞中的目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是

受體細(xì)胞通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程合成出相應(yīng)的蛋白質(zhì)（生長(zhǎng)激素）

受體細(xì)胞通過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程合成出相應(yīng)的蛋白質(zhì)（生長(zhǎng)激素）

。