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某研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)改造乳酸桿菌,將其添加于飼料中,以提高家禽養(yǎng)殖效益??莶菅挎邨U菌可分泌一種可降解纖維素的酶,這種酶由W基因編碼。為在乳酸桿菌中表達(dá)W基因,需以圖1中質(zhì)粒為載體將W基因?qū)肴樗釛U菌,圖2為含W基因的DNA片段。回答下列問題:
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(1)采用PCR技術(shù)可以大量擴(kuò)增W基因,該過程包括將W基因解鏈(變性)、
引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合
引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合
(復(fù)性)和在
耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)
耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶)
作用下合成互補(bǔ)子鏈(延伸)。
(2)不同生物的DNA能夠連接的原因是其分子結(jié)構(gòu)相似、基本組成單位相同且均遵循
堿基互補(bǔ)配對
堿基互補(bǔ)配對
原則。將W基因與圖1所示的載體連接前應(yīng)使用限制酶
EcoRI、HindⅢ
EcoRI、HindⅢ
切割圖2中含W基因的DNA片段和載體,相對于單酶切,這種方法的優(yōu)點(diǎn)是
避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接(合理即可)
避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接(合理即可)
。
(3)所得重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸桿菌后,使用含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基篩選,以得到轉(zhuǎn)入W基因的乳酸桿菌。由于載體上的啟動(dòng)子往往具有物種特異性,W基因上游的啟動(dòng)子應(yīng)選擇
乳酸桿菌
乳酸桿菌
(填“枯草芽孢桿菌”“乳酸桿菌”或“枯草芽孢桿菌或乳酸桿菌”)的啟動(dòng)子。
(4)為確定只有導(dǎo)入重組質(zhì)粒的乳酸桿菌才具有分解纖維素的能力,研究人員用液體培養(yǎng)基分別培養(yǎng)下表所示菌種,取培養(yǎng)液的上清液測定酶活力,實(shí)驗(yàn)方案及測定結(jié)果如下表所示,表中的X應(yīng)為
導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌
導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌

菌種 酶活性相對值
乳酸桿菌 未檢出
X 未檢出
導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的乳酸桿菌 0.96

【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合
【答案】引物與單鏈相應(yīng)互補(bǔ)序列結(jié)合;耐高溫的DNA聚合酶(或Taq酶);堿基互補(bǔ)配對;EcoRI、HindⅢ;避免目的基因和載體的自身環(huán)化以及反向連接(合理即可);氨芐青霉素;乳酸桿菌;導(dǎo)入普通質(zhì)粒的乳酸桿菌
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:23引用:1難度:0.5
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    (1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
     
    (答出2項(xiàng))等。
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    (填酶)切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入
     
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    發(fā)布:2024/12/20 2:30:1組卷:16引用:5難度:0.5
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    限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG
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    發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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