蜂毒前溶血肽原是prepromelittin基因（以下簡(jiǎn)稱PL基因）的表達(dá)產(chǎn)物，在蜜蜂體內(nèi)合成后首先加工成蜂毒溶血肽原（蜂毒肽前體蛋白），被進(jìn)一步水解形成分泌蛋白蜂毒肽。與蜂毒肽相比，蜂毒前溶血肽原具有較大的溶解度，且對(duì)細(xì)胞的破壞能力小，可利用基因工程方法合成蜂毒肽的前體產(chǎn)物。
（1）生產(chǎn)蜂毒肽常選用微生物做受體細(xì)胞，優(yōu)點(diǎn)是 微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，生長(zhǎng)繁殖快、容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，生長(zhǎng)繁殖快、容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作（答出兩點(diǎn)即可）；原核細(xì)胞 不能不能（填“能“或“不能“）將蜂毒溶血肽原加工成蜂毒肽，原因是 原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工。
（2）為了解決（1）中的問(wèn)題，對(duì)蜂毒前溶血肽原基因進(jìn)行改造（如圖1），以便后期用羥胺（一種能專一性裂解特定兩個(gè)氨基酸之間肽鍵的化合物）對(duì)生產(chǎn)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工。根據(jù)圖1推測(cè)羥胺的識(shí)別位點(diǎn)是 Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）。為實(shí)現(xiàn)最終生產(chǎn)有活性的蜂毒肽，與原DNA序列相比，改造后的序列末端還刪除了Gly的對(duì)應(yīng)編碼鏈序列，推測(cè)刪除的理由是 有活性的蜂毒肽末端沒(méi)有甘氨酸有活性的蜂毒肽末端沒(méi)有甘氨酸。改造后的DNA編碼區(qū)序列長(zhǎng)度為 213213bp。
注：①陰影：蜂毒肽序列；方框：Asn-Gly位點(diǎn)；
②圖1中所示的“原DNA序列”為蜂毒前溶血肽原的編碼區(qū)序列的編碼鏈；
③甲硫氨酸，縮寫(xiě)為M，由起始密碼子AUG編碼；丙氨酸（Asn），縮寫(xiě)為N；
④甘氨酸（Gly），縮寫(xiě)為G，由密碼子GGU、GGC、GGA、GGG編碼。
⑤終止密碼子UAA、UGA和UAG
（3）根據(jù)改造后的基因序列，利用人工化學(xué)合成方法進(jìn)行全基因合成，設(shè)計(jì)并合成引物對(duì)合成基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列的長(zhǎng)度越長(zhǎng)、GC含量越高，PCR過(guò)程中退火溫度的設(shè)定值越 高高。將PCR產(chǎn)物和pGEX-4T-1載體利用酶 EcoRI、SalI和DNA連接酶（限制酶+DNA連接酶）EcoRI、SalI和DNA連接酶（限制酶+DNA連接酶）進(jìn)行基因表達(dá)載體的構(gòu)建，獲得蜂毒前溶血肽原與GST（一種標(biāo)簽蛋白）融合表達(dá)重組質(zhì)粒pGEX-4T-1/PPMe（見(jiàn)圖2）。擴(kuò)增PL基因時(shí)設(shè)計(jì)了引物對(duì)M1和M2，其中M1的部分序列是：5'-GAATTC-3'且EcoRⅠ的識(shí)別序列是GAATTC，請(qǐng)續(xù)寫(xiě)出該引物的后8個(gè)堿基5'ATGAAATTATGAAATT3'。
（4）將重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至 不含有不含有（“含有“或“不含有”）pGEX-4T-1/PPMel的大腸桿菌的感受態(tài)細(xì)胞，借助PCR和電泳鑒定是否轉(zhuǎn)化成功：凝膠中DNA分子的遷移速率與 大?。ㄩL(zhǎng)度），構(gòu)象（形狀），電荷，凝膠濃度，電壓大小（長(zhǎng)度），構(gòu)象（形狀），電荷，凝膠濃度，電壓有關(guān)（答2點(diǎn)）。
（5）若培育相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因植物；常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，需將目的基因插入質(zhì)粒的 T-DNAT-DNA中，最后通過(guò)植物組織培養(yǎng)技術(shù)培育轉(zhuǎn)基因植株。
【答案】微生物生理結(jié)構(gòu)和遺傳物質(zhì)簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，生長(zhǎng)繁殖快、容易進(jìn)行遺傳物質(zhì)操作；不能；原核細(xì)胞無(wú)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無(wú)法對(duì)表達(dá)出的蜂毒前溶血肽原進(jìn)行加工；Asn-Gly（NG丙氨酸-甘氨酸）；有活性的蜂毒肽末端沒(méi)有甘氨酸；213；高；EcoRI、SalI和DNA連接酶（限制酶+DNA連接酶）；ATGAAATT；不含有；大?。ㄩL(zhǎng)度），構(gòu)象（形狀），電荷，凝膠濃度，電壓；T-DNA
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/23 12:26:7組卷：13引用：2難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
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（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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