普通棉花中含β甘露糖苷酶基因（GhMmaA2），能在纖維細(xì)胞中特異性表達(dá)，產(chǎn)生的β甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構(gòu)建了反義GhMnaA2基因表達(dá)載體，利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入棉花細(xì)胞，成功獲得轉(zhuǎn)基因棉花品種，具體過程如圖。請分析回答：

（1）纖維細(xì)胞E6啟動子基本組成單位為

4種脫氧核苷酸

4種脫氧核苷酸

，基因表達(dá)載體除了圖示組成外，至少還有

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

復(fù)制原點(diǎn)、終止子、標(biāo)記基因

等（至少答兩個），構(gòu)建基因載體的目的是使目的基因穩(wěn)定存在并且可以遺傳在下一代，使目的基因能夠

表達(dá)和發(fā)揮作用

表達(dá)和發(fā)揮作用

。
（2）PCR技術(shù)擴(kuò)增β-甘露糖苷酶基因（GhMnaA2）原理是

DNA復(fù)制

DNA復(fù)制

，該過程除需要根據(jù)

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

GhMnaA2兩端部分核苷酸序列

設(shè)計特異性引物序列處為保證GhMnaA2能插入到質(zhì)粒2中，還需要在引物的

5′

5′

端添加限制酶識別序列。
（3）為什么不能用GhMnaA2探針進(jìn)行DNA分子雜交來鑒定基因表達(dá)載體是否導(dǎo)入棉花細(xì)胞？

因?yàn)槊藁?xì)胞中本來就有GhMna2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對

因?yàn)槊藁?xì)胞中本來就有GhMna2，不管是否導(dǎo)入都能與該探針發(fā)生堿基互補(bǔ)配對

。
（4）③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達(dá)載體。用SmaI酶和NotI酶切割正義基因表達(dá)載體獲得0.05kb、3.25kb、5.95kb、8.45kb四種長度的DNA片段，則用NotI酶切反義基因表達(dá)載體獲得DNA片段的長度應(yīng)是

6.0kb

6.0kb

和

11.7kb

11.7kb

。
（5）導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)的反義GhMnaA2能阻止β-甘露糖甘酶合成，使棉纖維更長原理是

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯）

反義GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA能與棉花細(xì)胞內(nèi)的GhMnaA2轉(zhuǎn)錄的mRNA互補(bǔ)配對，從而抑制基因的表達(dá)（翻譯）

。