科研人員研究調控蔗糖轉移酶基因（SUC2）的兩種蛋白質Snf1和Snf2之間的相互作用的原理如下：真核細胞基因起始轉錄需要有轉錄激活因子的參與。酵母轉錄激活因子GAL4在結構上由DNA結構功能域（BD）和轉錄激活結構域（AD）組成。兩個結構域分開時不能激活有轉錄，只有當兩者空間上接近時，GAL4轉錄因子才具有活性。BD與基因上游激活序列UAS結合后，激活AD與啟動子結合，使啟動子下游基因轉錄。如圖1為研究相互作用的X蛋白和Y蛋白的機制模式圖。
（1）操作中，首先需要用 限制酶和DNA連接限制酶和DNA連接酶將目的基因分別插入到兩個酵母表達載體中，得到兩種融合表達載體（如圖2）。酶切時通常選用兩種不同的酶，這樣做可以產生不同的黏性末端，從而 產生不同的黏性末端，保證目的基因按正確的方向連接；防止自身環(huán)化產生不同的黏性末端，保證目的基因按正確的方向連接；防止自身環(huán)化（寫出一個目的即可）。
（2）酵母菌染色體上能被GAL4激活轉錄而且顯示兩種蛋白質相互作用的基因稱為報告基因。在操作中，還需要構建含報告基因載體來轉化酵母菌。若用AUR1-C（抗生素AbA抗性基因）作為報告基因。那么作為被轉化的酵母細胞在抗生素抗性上應是無AbA抗性的。轉化后需要在相應的培養(yǎng)基上培養(yǎng)和篩選，選擇導入了 融合表達載體和報告基因載體融合表達載體和報告基因載體（填“融合表達載體”“報告基因載體”或“融合表達載體和報告基因載體”）的酵母細胞。除此之外，還要將酵母的GAL4基因敲除，以排除細胞內源轉錄因子GAL4的影響。
（3）LacZ基因編碼產生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal產生藍色物質，使菌落呈現(xiàn)藍色；否則菌落用為白色?？蒲腥藛T采用LacZ作為報告基因，根據(jù)上述原理和操作步驟，驗證了蛋白質Snf1和Snf2之間存在相互作用。寫出實驗思路 分別構建BD-Snf1和AD-Snf2兩種融合表達載體，轉化酵母細胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色分別構建BD-Snf1和AD-Snf2兩種融合表達載體，轉化酵母細胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色。
（4）科研人員對（3）的實驗結果進行分析：若出現(xiàn) 藍色藍色（填“藍色”或“白色”）菌落，說明蛋白質Snf1和Snf2之間存在相互作用。
【考點】基因工程的操作過程綜合；遺傳信息的轉錄和翻譯．
【答案】限制酶和DNA連接；產生不同的黏性末端，保證目的基因按正確的方向連接；防止自身環(huán)化；融合表達載體和報告基因載體；分別構建BD-Snf1和AD-Snf2兩種融合表達載體，轉化酵母細胞，在添加X-gal的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，觀察菌落顏色；藍色
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
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