回答與轉(zhuǎn)基因植物的培育和植物克隆有關(guān)的問(wèn)題：
木瓜環(huán)斑病毒（PRV）是一種對(duì)木瓜危害極大的病毒，科學(xué)家通過(guò)基因工程技術(shù)將抗環(huán)斑病毒基因（PRSV）導(dǎo)入木瓜中表達(dá)出抗環(huán)斑病蛋白，從而獲得抗環(huán)斑病的木瓜。
（1）構(gòu)建重組DNA分子時(shí)，使用兩種限制性核酸內(nèi)切酶處理，優(yōu)點(diǎn)是可防止目的基因和切割后的載體DNA自身環(huán)化及

反向拼接

反向拼接

。為使PRSV高效表達(dá)，需要對(duì)重組載體上目的基因相關(guān)的

啟動(dòng)部位（或啟動(dòng)子）

啟動(dòng)部位（或啟動(dòng)子）

序列進(jìn)行修飾。
（2）獲取活性強(qiáng)的農(nóng)桿菌菌液，通過(guò)冰浴、離心、去上清液等相應(yīng)處理，加入適量預(yù)冷的含15%甘油的

CaCl₂

CaCl₂

溶液，制成感受態(tài)農(nóng)桿菌細(xì)胞。轉(zhuǎn)化后的農(nóng)桿菌要正常培養(yǎng)一段時(shí)間，才能置于含特定抗生素的培養(yǎng)基上篩選，正常培養(yǎng)一段時(shí)間的目的是

讓農(nóng)桿菌恢復(fù)正常的生理狀態(tài)，表達(dá)抗生素抗性基因

讓農(nóng)桿菌恢復(fù)正常的生理狀態(tài)，表達(dá)抗生素抗性基因

。優(yōu)先選用木瓜

受傷的

受傷的

（受傷的/完好的）葉片與含重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌共培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化，促使其不斷分裂形成愈傷組織。
（3）試管苗需鍛煉后才可移栽至大田，移栽時(shí)需先洗去

沾在根上的瓊脂培養(yǎng)基

沾在根上的瓊脂培養(yǎng)基

以免栽后發(fā)霉。
（4）為了快速獲得穩(wěn)定遺傳的抗環(huán)斑病木瓜，可選擇

花藥離體

花藥離體

培養(yǎng)獲得的細(xì)胞系作為受體細(xì)胞。