腸道病毒71型（EV71）為單股正鏈RNA病毒，是引起手足口病的主要病原體之一，在EV71中，病毒結(jié)構(gòu)蛋白1（VP1）為主要的中和抗原（中和抗原與中和抗體結(jié)合后能阻止病原體入侵與增殖）。如圖為利用重組大腸桿菌表達(dá)VP1蛋白，并以VP1蛋白為抗原制備單克隆抗體的過程?；卮鹨韵聠栴}。
（1）重組大腸桿菌中，由EV71病毒的RNA構(gòu)建cDNA需經(jīng)過 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄過程，隨后cDNA通過PCR技術(shù)擴(kuò)增。將目的基因?qū)氪竽c桿菌需要構(gòu)建表達(dá)載體，常用的表達(dá)載體是 質(zhì)粒質(zhì)粒。
（2）在小鼠腹腔內(nèi)注射VP1蛋白進(jìn)行免疫，在35天獲取B淋巴細(xì)胞懸液進(jìn)行融合。在獲取B淋巴細(xì)胞前3天需在腹腔再次注射VP1蛋白，這樣做的原因是 二次免疫后，產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞更多二次免疫后，產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞更多。
（3）缺失HPRT基因的細(xì)胞無法在HAT培養(yǎng)基中生存，HAT培養(yǎng)基可以篩選出骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的雜交瘤細(xì)胞，其它細(xì)胞都會(huì)死亡。據(jù)此推測(cè)，在單克隆抗體制備過程中缺失HPRT基因的細(xì)胞是 骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（填“大腸桿菌”“B淋巴細(xì)胞”“骨髓瘤細(xì)胞”）。
（4）在雜交瘤細(xì)胞篩選培養(yǎng)過程中需在培養(yǎng)基中添加胎牛血清，并置于37℃、50mL/LCO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱中CO2的作用是 維持pH值穩(wěn)定維持pH值穩(wěn)定。
（5）該單克隆抗體成功制備后，對(duì)于防治手足口病有什么作用？快速檢測(cè)是否感染，有效治療患者快速檢測(cè)是否感染，有效治療患者
【考點(diǎn)】單克隆抗體及其應(yīng)用．
【答案】逆轉(zhuǎn)錄；質(zhì)粒；二次免疫后，產(chǎn)生的B淋巴細(xì)胞更多；骨髓瘤細(xì)胞；維持pH值穩(wěn)定；快速檢測(cè)是否感染，有效治療患者
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/8/8 8:0:9組卷：13引用：3難度：0.5
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1．為實(shí)現(xiàn)對(duì)肝癌的有效治療，研究人員通過比較肝腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞間的差異，篩選有效的免疫治療靶點(diǎn)，制備相應(yīng)單克隆抗體并構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物。
（1）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的CLDN6蛋白能夠促進(jìn)腫瘤發(fā)生，選定其作為單克隆抗體的作用靶點(diǎn)。CLDN6蛋白是一個(gè)跨膜蛋白，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)，制備免疫小鼠所用的抗原時(shí)，應(yīng)提取區(qū)基因序列用于設(shè)計(jì)抗原。
（2）將CLDN6蛋白抗原注射到小鼠體內(nèi)，從該小鼠脾臟中獲取細(xì)胞，誘導(dǎo)其與骨髓瘤細(xì)胞融合，利用篩選得到雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)克隆化培養(yǎng)和抗體陽(yáng)性檢測(cè)，多次篩選得到產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞，最終通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)獲得大量單克隆抗體。
（3）將該單克隆抗體與抗癌藥物DMI 結(jié)合構(gòu)建抗體—藥物偶聯(lián)物（CLDN6-DMI）。用不同濃度的游離DMI、CLDN6-DMI或lgG-DMI（無關(guān)抗體-DMI）分別處理高表達(dá)CLDN6細(xì)胞和低表達(dá)CLDN6細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞活力，結(jié)果如圖1：
由圖可知，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞，依據(jù)是。
（4）如圖2表示抗體—藥物偶聯(lián)物CLDN6-DMI的作用機(jī)制：由圖分析，CLDN6-DMI能特異性殺傷高表達(dá)CLDN6細(xì)胞的原因是。發(fā)布：2024/12/19 7:0:1組卷：3引用：1難度：0.6 -
2．為減少鼠源單克隆抗體可能引起的副作用，某研究團(tuán)隊(duì)對(duì)鼠源單克隆抗體F進(jìn)行改造，制備了人—鼠嵌合抗體F′，具體流程為：提取鼠源雜交瘤細(xì)胞RNA，逆轉(zhuǎn)錄后通過PCR擴(kuò)增抗體F的基因序列，將其部分序列用人的相應(yīng)抗體基因序列進(jìn)行替換，再構(gòu)建表達(dá)載體，在體外制備人﹣鼠嵌合抗體F′。為檢測(cè)抗體性質(zhì)，他們測(cè)定了F′單獨(dú)與抗原作用時(shí)對(duì)抗原的結(jié)合能力以及F′和F同時(shí)與抗原作用（F′與F初始濃度相同）時(shí)F′對(duì)抗原的結(jié)合能力，結(jié)果如下圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/19 1:0:1組卷：39引用：4難度：0.5 -
3．2020年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予發(fā)現(xiàn)丙肝病毒的三位科學(xué)家。丙肝病毒引起的丙型肝炎可導(dǎo)致肝臟慢性炎癥壞死和纖維化，部分患者可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。如圖為利用小鼠甲為實(shí)驗(yàn)材料研制丙肝病毒的單克隆抗體的實(shí)驗(yàn)流程。下列敘述錯(cuò)誤的是（ ?。?br />
發(fā)布：2024/12/19 6:0:1組卷：42引用：2難度：0.6
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