通常真核細胞翻譯的起始必須依賴于mRNA的5′端帽子結構，而內部核糖體進入位點（IRES）則是位于mRNA內部的核糖體識別、結合序列，IRES使翻譯可以從mRNA內部開始。人溶菌酶和人乳鐵蛋白是人乳中重要的抗菌蛋白，科研人員構建人溶菌酶基因（hLYZ）和人乳鐵蛋白基因（hLTF）雙基因表達載體，并獲得轉基因牛胚胎。如圖表示雙基因表達載體的主要構建過程，請回答下列問題。
（1）IRES的基本單位是 核糖核苷酸核糖核苷酸，翻譯時核糖體在mRNA移動方向是 5'→3'5'→3'（5′→3′或3′→5′）。與兩個基因直接連接形成融合基因相比，兩個基因之間插入IRES序列的意義是 便于得到兩種具有一定功能的蛋白質便于得到兩種具有一定功能的蛋白質。
（2）為實現hLTF與IRES序列的連接，在PCR擴增基因片段時通常在引物的5′端添加特定的限制酶識別序列，而不在3′端添加的原因是 使引物的3'端與模板鏈嚴格互補配對，保證子鏈的延伸使引物的3'端與模板鏈嚴格互補配對，保證子鏈的延伸。
（3）過程①中，用 XbaⅠ和NheⅠXbaⅠ和NheⅠ切割質粒a、b后，再用 電泳法電泳法（方法）分離，收集質粒a的hLTF片段，與質粒b的大片段連接，獲得重組質粒1。
（4）過程②中，用BamHⅠ分別處理重組質粒1和質粒c,再連接形成的重組質粒不止一種，這是因為 目的基因與質粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質粒c連接等目的基因與質粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質粒c連接等。用BamHⅠ對重組質粒2進行酶切，獲得的DNA片段大小為 3.2kb和8.2kb3.2kb和8.2kb。
（5）科研人員以包含重組質粒2的脂質體轉染乳腺上皮細胞時，在細胞培養(yǎng)液中加入一定濃度的新霉素的主要目的是 便于篩選導入重組質粒2的牛乳腺上皮細胞便于篩選導入重組質粒2的牛乳腺上皮細胞。選擇乳腺上皮細胞作為受體細胞便于檢測 hLYZ和hLTF能否表達hLYZ和hLTF能否表達。
（6）研究人員試圖以轉hLYZ與hLTF的奶牛乳腺上皮細胞作為供體細胞，培養(yǎng)轉基因克隆胚胎，在此過程中主要涉及的現代生物技術有 體細胞核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、早期胚胎培養(yǎng)技術體細胞核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、早期胚胎培養(yǎng)技術。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】核糖核苷酸；5'→3'；便于得到兩種具有一定功能的蛋白質；使引物的3'端與模板鏈嚴格互補配對，保證子鏈的延伸；XbaⅠ和NheⅠ；電泳法；目的基因與質粒c存在正反連接、目的基因多拷貝與質粒c連接等；3.2kb和8.2kb；便于篩選導入重組質粒2的牛乳腺上皮細胞；hLYZ和hLTF能否表達；體細胞核移植技術、動物細胞培養(yǎng)技術、早期胚胎培養(yǎng)技術
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：32引用：1難度：0.6
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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