科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對干擾素基因缺失小鼠進行基因治療。其技術(shù)流程如圖1：

（1）步驟①的技術(shù)名稱是

動物體細胞核移植技術(shù)

動物體細胞核移植技術(shù)

。
（2）將基因?qū)隕S細胞而不是導入到上皮細胞是因為ES細胞具有

發(fā)育的全能性

發(fā)育的全能性

。
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有干擾素基因的

基因表達載體

基因表達載體

，對干擾素基因片段和質(zhì)粒進行酶切時，可選用的限制酶組合為

HindⅢ和PstⅠ

HindⅢ和PstⅠ

或

EcoRⅠ和PstⅠ

EcoRⅠ和PstⅠ

。
（4）為了得到實驗所需的大量干擾素基因，研究人員利用PCR 技術(shù)進行擴增。由于DNA復制時，子鏈只能由5′向3′方向延伸，因此可以從圖2A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取

B和C

B和C

作為引物。若要將1個干擾素基因復制10 次，則需要在緩沖液中至少加入

2¹¹-2

2¹¹-2

個引物。

（5）將步驟③獲得的ES細胞在熒光顯微鏡下觀察，選擇發(fā)

綠

綠

色熒光的細胞進行體外誘導。為檢測干擾素基因是否表達，可以采用

抗原-抗體雜交

抗原-抗體雜交

的方法。