人工合成的Bt-Cry5Aa基因編碼一種毒蛋白可殺死棉鈴蟲。研究者將Bt-Cry5Aa基因轉(zhuǎn)入棉花，并對棉花的抗蟲性進行鑒定和遺傳分析。
（1）用 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶酶將Bt-Cry5Aa基因與質(zhì)粒（其標記基因是卡那霉素抗性基因）連接構(gòu)建重組DNA，然后用 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法法將其導(dǎo)入普通棉花中，獲得T0代植株。
（2）提取T0代棉花的總DNA，依據(jù)Bt-Cry5Aa基因的堿基序列設(shè)計 引物引物，對T0代植株進行PCR檢測分析，結(jié)果如圖。其中4號和6號是 不含目的基因不含目的基因植株的檢測結(jié)果。將棉鈴蟲接種于不同株系的植株上，7號植株表現(xiàn)為非抗蟲，但PCR檢測結(jié)果為 陽性/含目的基因陽性/含目的基因，請分析可能的原因是 Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達效率太低Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達效率太低。
（3）取T0代抗蟲棉自交獲得種子，種植后獲得T1代植株845株，經(jīng)卡那霉素點涂葉片（卡那霉素能引起普通植株綠色器官黃化），未出現(xiàn)黃化現(xiàn)象的植株有630株，據(jù)此可知抗蟲棉與非抗蟲棉的比約為 3：13：1，其遺傳遵循 基因分離基因分離定律。
（4）提取T1代抗蟲植株不同發(fā)育時期組織器官的蛋白質(zhì)，檢測毒蛋白的表達量。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn) 隨著棉花植株的生長發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降隨著棉花植株的生長發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降，說明抗蟲棉對棉鈴蟲的殺蟲效果隨棉株的生長發(fā)育而呈現(xiàn)降低趨勢。
（5）綜上可知，科研人員在 分子水平和個體分子水平和個體水平上對轉(zhuǎn)基因抗蟲棉進行了檢測與鑒定。
（6）生產(chǎn)上常將上述轉(zhuǎn)基因棉花與非轉(zhuǎn)基因棉花混合播種，其目的是 減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度。
【答案】限制酶和DNA連接酶；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法/花粉管通道法；引物；不含目的基因；陽性/含目的基因；Bt—Cry5Aa基因突變或Bt—Cry5Aa基因表達效率太低；3：1；基因分離；隨著棉花植株的生長發(fā)育，植株中的Bt毒蛋白含量下降；分子水平和個體；減緩害蟲種群抗Bt毒蛋白基因頻率的增加速度
【解答】
【點評】
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