食物中生物胺過量會引起頭痛、胃腸道不適和過敏等不良反應，嚴重時甚至危及生命，因此必須對食品中生物胺的含量進行監(jiān)控。來自微生物的多銅氧化酶（MCO）能高效分解生物胺，我國科研人員將發(fā)酵乳桿菌的MCO基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌中，實現(xiàn)了多銅氧化酶的規(guī)?；a(chǎn)?；卮鹣铝袉栴}：
（1）上述生物工程的基本步驟包括：①從發(fā)酵乳桿菌中獲取目的基因→②

構(gòu)建基因表達載體

構(gòu)建基因表達載體

→③將目的基因?qū)氪竽c桿菌細胞→④篩選和鑒定含目的基因的受體細胞→⑤借助

發(fā)酵

發(fā)酵

工程規(guī)?；a(chǎn)目標蛋白
（2）在使用PCR技術(shù)擴增獲取的MCO基因時，引物的功能是

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。
（3）在常規(guī)PCR的每一輪擴增反應中，溫度隨時間的高低變化順序是

C

C

。

（4）若目的基因MCO經(jīng)限制酶切開后呈如圖所示的末端，那么載體質(zhì)粒pCLY15需用

KpnⅠ

KpnⅠ

和

XmaⅠ

XmaⅠ

切開，才能與MCO片段高效連接。

（5）為了鑒別載體質(zhì)粒pCLY15空載還是“滿載”，某同學在選擇培養(yǎng)基中添加X—gal試劑，以培養(yǎng)微生物后菌落的顏色進行鑒別，他能達到目的嗎？

可以

可以

，原因是

構(gòu)建表達成功的重組質(zhì)粒中β—lacZ基因被破壞所以不顯色，而沒有構(gòu)建成功的質(zhì)粒β—lacZ基因未破壞，所以會顯色

構(gòu)建表達成功的重組質(zhì)粒中β—lacZ基因被破壞所以不顯色，而沒有構(gòu)建成功的質(zhì)粒β—lacZ基因未破壞，所以會顯色

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