在PCR技術(shù)中，除了作為復(fù)制對象的長鏈DNA之外，反應(yīng)溶液中還添加有作為引物的短DNA、dNTP（脫氧三磷酸核苷酸，N表示任意某一種堿基）和酶。實驗時需要使反應(yīng)溶液的溫度周期性地發(fā)生變化以完成“變性—復(fù)性—延伸”的循環(huán)。DNA復(fù)性溫度與互補堿基對之間的氫鍵數(shù)呈正相關(guān)。

（1）PCR是

聚合酶鏈式反應(yīng)

聚合酶鏈式反應(yīng)

的縮寫，PCR反應(yīng)溶液中添加Mg²⁺，其作用是

激活DNA聚合酶的活性

激活DNA聚合酶的活性

。
（2）實驗1：在圖1的引物1到引物4中，只使用1種作為引物。復(fù)性的溫度設(shè)定為T℃，PCR后只合成出了與模板DNA2相同的單鏈，該實驗使用的引物是引物

引物-2

引物-2

。
實驗2：將引物變?yōu)閳D1中的引物3和引物4，其他條件與實驗1相同的情況下進行PCR，雙鏈DNA完全沒有被復(fù)制，請在答題卡中，將引物3和引物4與模板鏈區(qū)段1-4結(jié)合的關(guān)系繪制出來。

。
（3）實驗3：對圖2中的雙鏈DNA，使用引物5和引物6，將復(fù)性的溫度設(shè)定為T℃，進行了PCR。結(jié)果是雙鏈DNA完全得不到復(fù)制。而當設(shè)定溫度改變后，雙鏈DNA得到了復(fù)制，溫度改變的大致思路是

適當降低復(fù)性溫度

適當降低復(fù)性溫度

。
（4）實驗4：PCR技術(shù)與電泳鑒定結(jié)合進行DNA測序。以待測序的DNA鏈作為模板鏈，使用3′-TATA......ATGCGCA-5′末端結(jié)合了高敏度檢測化合物X的DNA單鏈序列作為引物，在第1次實驗中，用dNTP進行反應(yīng)。第2次實驗，在第1次實驗使用上述dNTP的基礎(chǔ)上，將反應(yīng)混合物分為四個試管，分別加入四種雙脫氫三硝酸核苷酸即ddNTP，即核苷酸在2、3號都脫氧（ddATP、ddCTP、ddTTP、ddGTP結(jié)構(gòu)見圖4），每個試管只加一種。第1次與第2次實驗四支試管，在經(jīng)過相同的溫度變化循環(huán)后，對反應(yīng)溶液進行了適當?shù)奶幚?，使全部的DNA以單鏈DNA的形式存在。使用能區(qū)分開一個堿基長度差異的凝膠電泳法對含有化合物X的單鏈DNA進行分析，獲得了如圖5所示的結(jié)果。
①ddNTP一旦參與聚合反應(yīng)，則DNA單鏈延伸即終止，原因是

ddNTP的3號碳上沒羥基，無法與游離脫氧核苷酸形成磷酸二鍵

ddNTP的3號碳上沒羥基，無法與游離脫氧核苷酸形成磷酸二鍵

。
②請根據(jù)圖5寫出模板鏈堿基序列：

5'TAGCGTAGTA3'

5'TAGCGTAGTA3'

（按5′→3′順序?qū)懀?/h1>