三氯生是一種抑菌物質(zhì)，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細(xì)胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。
（1）通過PCR方法獲取fabV基因時(shí)，Taq酶只能從 引物的3′端引物的3′端延伸DNA鏈，而不能從頭開始合成DNA，因此需要先根據(jù) 目的基因fabV基因兩端堿基序列目的基因fabV基因兩端堿基序列設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列。反應(yīng)體系的初始溫度設(shè)置在90～95℃的目的是 使fabV基因受熱變性后解為單鏈使fabV基因受熱變性后解為單鏈。
（2）在④步驟中，科研者需將大腸桿菌菌液利用 稀釋涂布平板稀釋涂布平板法接種到加有 三氯生三氯生的細(xì)菌培養(yǎng)基上，待菌落長(zhǎng)成后，直接挑取菌落加入到PCR反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行基因鑒定。PCR過程中不需要先提取細(xì)菌DNA的原因是 大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA。
（3）某科研團(tuán)隊(duì)將可以受溫度調(diào)控的基因插入上述選出的重組質(zhì)粒中，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會(huì)抑制P1，R基因在高溫下會(huì)抑制P2。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖2質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達(dá)GFP蛋白，而高溫下只表達(dá)lacz蛋白。則lacZ基因插在 P1→T1P1→T1之間，GFP基因插在 P2→T2P2→T2之間。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】引物的3′端；目的基因fabV基因兩端堿基序列；使fabV基因受熱變性后解為單鏈；稀釋涂布平板；三氯生；大腸桿菌屬于原核生物，其DNA是裸露的，可以直接作為PCR模板，且PCR變性階段的高溫可直接殺死細(xì)菌，使其釋放DNA；P1→T1；P2→T2
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：33引用：3難度：0.5
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt="菁優(yōu)網(wǎng)" src="https://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．PCR技術(shù)不僅可以擴(kuò)增目的基因，還可用于定點(diǎn)誘變目的基因等。大引物PCR就是一種定點(diǎn)突變技術(shù)。大引物PCR需要用到引物進(jìn)行兩次PCR，其操作步驟為：
①根據(jù)目的基因序列設(shè)計(jì)引物，得到兩個(gè)常規(guī)引物，分別為常規(guī)上游引物和常規(guī)下游引物；
②根據(jù)突變堿基所處序列位置設(shè)計(jì)突變上游引物，突變位點(diǎn)位于突變引物序列的中間位置
③由突變上游引物與常規(guī)下游引物進(jìn)行第一次PCR反應(yīng)得到下游大引物；
④用得到的下游大引物中和另一個(gè)常規(guī)上游引物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，得到突變目的基因序列?；卮鹣铝袉栴}：
（1）PCR擴(kuò)增的第一步是使雙鏈模板DNA變性。DNA中G+C的含量與變性要求的溫度有關(guān)，DNA中G+C的含量越多，要求的變性溫度越高。其原因是。該P(yáng)CR擴(kuò)增技術(shù)所需的基本條件是種引物、原料、模板、。
（2）在第一次PCR反應(yīng)中，形成圖示雙鏈DNA至少要經(jīng)過次復(fù)制。第一次PCR的產(chǎn)物DNA的條鏈作為第二次PCR所用的引物。與X射線誘變相比，該突變技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是。
（3）如果要利用微生物進(jìn)一步克隆PCR定點(diǎn)誘變產(chǎn)物，其步驟包括：、、微生物的篩選和培養(yǎng)、從菌群中獲取更多目的基因。將獲取目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，將馬鈴薯細(xì)胞培養(yǎng)成幼苗時(shí)經(jīng)過的兩個(gè)過程是。檢測(cè)目的基因是否在馬鈴薯細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出了mRNA，所采用的方法是。發(fā)布：2024/12/30 23:0:2組卷：32引用：3難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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