人胰島素基因表達的最初產物是一條肽鏈構成的前胰島素原，經(jīng)加工后形成兩條肽鏈（A鏈和B鏈）的有生物活性的胰島素。此后科學家又提出了利用基因工程改造大腸桿菌生產人胰島素的兩種方法：“AB”法是根據(jù)胰島素A、B兩條肽鏈的氨基酸序列人工合成兩種DNA片段，利用工程菌分別合成兩條肽鏈后將其混合自然形成胰島素；“BCA”法是利用人體某細胞中的mRNA得到胰島素基因，表達出胰島素原后再用特定酶切掉C肽段。這兩種方法使用同一種質粒作為載體。請據(jù)圖分析并回答下列問題：

（1）由于

一種氨基酸可能對應多種密碼子

一種氨基酸可能對應多種密碼子

，“AB”法中人工合成的兩種DNA片段均有多種可能的序列。“BCA”法是利用人體

胰島B

胰島B

細胞中的mRNA，再由mRNA經(jīng)

逆轉錄

逆轉錄

得到的胰島素基因，

“AB”和“BCA”

“AB”和“BCA”

（填“AB”、“BCA”或“AB和BCA”）法獲取的目的基因中不含人胰島素基因啟動子。
（2）如圖是利用基因工程生產人胰島素過程中使用的質粒及目的基因的部分結構。為使目的基因與載體正確連接，在設計PCR引物時可添加限制酶

Xhol和Munl

Xhol和Munl

的識別序列，PCR引物應該添加在識別序列的

3′

3′

（填“3′或5′）端。通過上述方法獲得人的胰島素基因后，需要通過PCR技術進行擴增，若計劃用1個胰島素基因為模板獲得m（m大于2）個胰島素基因，則消耗的引物總量是

2m-2

2m-2

個。引物序列中的的GC含量越高，對PCR過程中的

變性

變性

步驟（寫出具體過程）影響最大，越

不利于

不利于

（填“有利于”或“不利于”）目標DNA的擴增。
（3）PCR擴增的產物一般通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，下列敘述中正確的有

BCD

BCD

。
A.PCR反應體系中需加入耐高溫的DNA聚合酶，該酶主要在退火過程起作用
B.待測樣品中DNA分子的大小和構象、凝膠的濃度等都會影響DNA在電泳中的遷移速率
C.進行電泳時，帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動
D.瓊脂糖溶液中加入的核酸染料利于DNA在紫外燈下被檢測
（4）β-半乳糖苷酶可以分解無色的X-gal產生藍色物質使菌落呈現(xiàn)藍色，否則菌落為白色。經(jīng)

鈣離子處理

鈣離子處理

（處理方法）大腸桿菌后，與重組質?；旌吓囵B(yǎng)一段時間，將大腸桿茵接種到添加了

氨芐青霉素

氨芐青霉素

和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出

白

白

色的菌落即為工程菌種。
（5）科學家利用蛋白質工程技術，研制出了易吸收、起效快的賴脯胰島素，獲得賴脯胰島素基因的途徑是：從預期的蛋白質功能出發(fā)→

設計預期的蛋白質結構

設計預期的蛋白質結構

→推測應有的氨基酸序列→找到相對應的脫氧核苷酸序列。