長(zhǎng)期高血糖可引發(fā)血管細(xì)胞衰老。科研人員為研究S蛋白在因高血糖引發(fā)的血管細(xì)胞衰老中的作用，以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因?qū)胙芗?xì)胞，實(shí)現(xiàn)S蛋白在血管細(xì)胞中的大量表達(dá)。腺病毒的遺傳物質(zhì)為DNA，其復(fù)制需要E₁、E₂、E₃.基因共同完成。為將S基因?qū)胂俨《?，科研人員首先構(gòu)建了含S基因的重組質(zhì)粒，過程如圖1所示。

（1）科研人員將S基因用

BamHⅠ和 EcoRⅠ

BamHⅠ和 EcoRⅠ

限制酶切割后，用DNA連接酶連入質(zhì)粒Ⅰ，得到重組質(zhì)粒Ⅰ（圖1甲所示），導(dǎo)入用CaCl₂處理制備的

感受態(tài)

感受態(tài)

細(xì)菌。用添加抗生紫的培養(yǎng)基篩選，對(duì)所長(zhǎng)出的單菌落提取質(zhì)粒，通過的方法可鑒定重組質(zhì)粒Ⅰ是否插入了S基因。
（2）用PmeI酶切重組質(zhì)粒Ⅰ獲得DNA片段。將此DNA片段與質(zhì)粒Ⅱ（圖1乙所示）共同轉(zhuǎn)化為重組質(zhì)粒Ⅱ（圖1丙所示）。使用添加的

卡那霉素

卡那霉素

的培養(yǎng)基可篩選得到成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒Ⅱ的菌落。
（3）將含S基因的重組質(zhì)粒Ⅱ，用PacI酶切后，獲得改造后的腺病毒DNA。將其導(dǎo)入A細(xì)胞（A細(xì)胞含有E₃基因，可表達(dá)E₃蛋白），如圖2所示。腺病毒DNA在A細(xì)胞內(nèi)能夠

復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成

復(fù)制并指導(dǎo)腺病毒外殼蛋白的合成

，從而產(chǎn)生大量重組腺病毒，腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上。用酶切時(shí)不能破壞啟動(dòng)子，原因是啟動(dòng)子是

RNA 聚合酶

RNA 聚合酶

識(shí)別和結(jié)合的部位，有了它才能驅(qū)動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
（4）綜合上述信息，從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優(yōu)點(diǎn)：

重組腺病毒只能在A細(xì)胞中才能夠復(fù)制，即使侵染其他細(xì)胞，也不能復(fù)制；重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因

重組腺病毒只能在A細(xì)胞中才能夠復(fù)制，即使侵染其他細(xì)胞，也不能復(fù)制；重組腺病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞后不整合到宿主細(xì)胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因

（寫出1點(diǎn)）。