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農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒上的T-DNA(序列已知)可以轉(zhuǎn)移并隨機(jī)插入被侵染植物的染色體DNA中。研究者將圖1中被侵染植物的DNA片段連接成環(huán),并以此環(huán)為模板,利用PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列,進(jìn)一步分析可確定T-DNA插入的具體位置。T-DNA的序列如圖2所示,虛線處省略了部分核苷酸序列。已知SalⅠ酶的識(shí)別序列為5'G↓TCGAC3'。
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(1)PCR技術(shù)擴(kuò)增時(shí)起關(guān)鍵作用的酶是
Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶)
Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶)
,其作用是
將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端
將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端
。
(2)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列時(shí),需要先根據(jù)
T-DNA基因兩端已知的堿基序列
T-DNA基因兩端已知的堿基序列
設(shè)計(jì)兩種特異性引物序列,利用圖中的引物
①④
①④
組合可擴(kuò)增出T-DNA兩側(cè)的未知序列。
(3)若只使用一種引物,通過PCR技術(shù)制備與T-DNA的b鏈相同的單鏈作為某些檢測(cè)的探針,則所選擇引物由5'→3'的前5個(gè)堿基序列為
5′-CTGTC-3′
5′-CTGTC-3′

(4)對(duì)PCR產(chǎn)物測(cè)序,經(jīng)分析得到了圖1中的未知序列。下列DNA單鏈序列中(虛線處省略了部分核苷酸序列),可能正確的是
A
A

A.5'-TCGACCACG_____ATGTCGA-3'
B.5-AATTCCATG_____CTGAATT-3'
C.5'-GCAATGCGT_____TCGGGAA-3'
D.5'-TTGATACGC_____CGAGTAC-3'
(5)PCR技術(shù)擴(kuò)增出T-DNA插入位置兩側(cè)的未知序列后,擴(kuò)增產(chǎn)物可用
瓊脂糖凝膠電泳
瓊脂糖凝膠電泳
技術(shù)進(jìn)行鑒定。

【答案】Taq酶(或耐高溫的DNA聚合酶);將游離的脫氧核苷酸連到引物的3'端;T-DNA基因兩端已知的堿基序列;①④;5′-CTGTC-3′;A;瓊脂糖凝膠電泳
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明:本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有,未經(jīng)書面同意,不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:9引用:1難度:0.5
相似題
  • 1.以下是有關(guān)分離與鑒別DNA的技術(shù),其中說法正確的是(  )

    發(fā)布:2024/12/15 16:30:6組卷:5引用:1難度:0.5
  • 2.科研人員克隆了豬白細(xì)胞抗原基因(SLA-2基因),構(gòu)建了該基因的真核表達(dá)載體,進(jìn)行了豬腎上皮細(xì)胞表達(dá)研究。實(shí)驗(yàn)的主要流程如圖1,SLA-2基因長(zhǎng)度為1100bp,質(zhì)粒B的總長(zhǎng)度為4445bp,其限制酶切點(diǎn)后的數(shù)字表示距復(fù)制原點(diǎn)的距離。請(qǐng)回答:
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    限制酶 BclⅠ NotⅠ XbaⅠ San3AⅠ
    識(shí)別序列及切割位點(diǎn) T↓GATCA GC↓GGCCGC T↓CTAGA ↓GATC
    (1)過程①中,PCR擴(kuò)增SLA-2的原理是
     
    ,下列4種引物中應(yīng)選擇的是
     
    。
    a  5'-GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
    b  5'-GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
    c  5'-GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC
    d  5'-GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC
    (2)過程②將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是
     
    ,該過程需要用
     
    處理大腸桿菌,使其成為感受態(tài)細(xì)胞。然后將大腸桿菌涂布在含有
     
    (抗生素)的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
    (3)若用Sau3AⅠ和XbaⅠ完全酶切質(zhì)粒C后電泳,請(qǐng)?jiān)诖痤}紙相應(yīng)位置畫出可能得到的電泳條帶。
    (4)科研中常用呤霉素對(duì)真核細(xì)胞進(jìn)行篩選,一般選擇最低致死濃度的前一個(gè)濃度作為篩選濃度的原因是:既可以讓大部分沒有抗性的細(xì)胞死亡又不會(huì)讓
     
    。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2,根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果最佳的嘌霉素篩選濃度為
     

    (5)過程⑦研究人員用小鼠抗SLA抗原肽單克隆抗體檢測(cè)腎上皮細(xì)胞生產(chǎn)的抗原肽,其原理是
     
    ,單克隆抗體能檢測(cè)其是否具有正確的
     
    ,從而是否具有生物活性。
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    發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:41引用:3難度:0.6
  • 3.下列關(guān)于“DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定”的實(shí)驗(yàn),說法錯(cuò)誤的是( ?。?/h2>

    發(fā)布:2024/12/15 6:30:1組卷:3引用:1難度:0.6
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