大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉染大麗輪枝菌，培育出表達綠色熒光蛋白的轉基因菌株，主要過程如圖（圖中a鏈和 b鏈分別是相應基因轉錄模板鏈）。分析回答：
（1）過程①中，PCR擴增sGFP的原理是 DNA的半保留復制DNA的半保留復制，該過程除需要根據 sGFP兩端（3′端）核苷酸序列sGFP兩端（3′端）核苷酸序列設計特異性引物序列外，為保證sCFP正確插入到質粒中，還需要在引物的5′端添加限制酶識別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5′→3′）為 AGCTAGCT。
（2）過程②需要的工具酶是 DNA連接酶DNA連接酶。研究中將sGFP插入到構巢曲霉啟動子和終止子之間的目的是 保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達。
（3）過程③中需要配制細菌培養(yǎng)基，配制時要在培養(yǎng)基滅菌并冷卻到80℃左右后，再加入用無菌水配制的適宜濃度的潮霉素溶液，潮霉素不能與培養(yǎng)基一同滅菌的原因是 潮霉素在滅菌時結構被破壞潮霉素在滅菌時結構被破壞。
（4）選擇過程③篩選培養(yǎng)得到的不同農桿菌菌落，分別提取細菌質粒DNA，并用BamHI和HindⅢ完全酶切可得 兩兩種長度不同的DNA片段。
（5）將導入重組質粒的農桿菌加入大麗輪枝菌的孢子細胞懸液中，在適宜條件完成轉染后利用濾膜過濾得到孢子細胞，再在真菌培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得菌落，最終通過檢測 大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】DNA的半保留復制；sGFP兩端（3′端）核苷酸序列；AGCT；DNA連接酶；保證sGFP能在大麗輪枝菌細胞中表達；潮霉素在滅菌時結構被破壞；兩；大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1難度：0.7
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