諾如病毒是一種單鏈RNA 病毒，可引起流行性急性腸胃炎的重要病原體。諾如病毒衣殼P蛋白上含有抗原位點(diǎn)和受體識(shí)別位點(diǎn)，在體外可單獨(dú)表達(dá)，被用于疫苗的免疫實(shí)驗(yàn)研究。

（1）人體感染諾如病毒后，會(huì)引發(fā)

特異性免疫（體液免疫）

特異性免疫（體液免疫）

免疫，在康復(fù)者血清中能夠檢測(cè)到

抗體

抗體

（物質(zhì)）。有研究表明感染后第 180 天記憶B細(xì)胞仍具有持久性，說(shuō)明這些細(xì)胞對(duì)機(jī)體具有

潛在的長(zhǎng)期保護(hù)（預(yù)防再次感染）

潛在的長(zhǎng)期保護(hù)（預(yù)防再次感染）

作用。
（2）研究人員希望借P蛋白治療由β蛋白沉積導(dǎo)致的阿爾茨海默癥，選取β蛋白作為免疫原，利用諾如病毒P顆粒作為疫苗載體，研究其免疫原性。研究人員將β蛋白基因插入P蛋白基因的恰當(dāng)位置，制備了重組P蛋白基因P-β（1780bp）后，采用雙酶切方法，通過(guò)NdeⅠ和XhoⅠ酶和pET載體質(zhì)粒（5230bp）構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-P-β，如圖1．對(duì)照組應(yīng)選用

②③

②③

。（多選，填寫(xiě)各項(xiàng)目前的序號(hào)。）
①諾如病毒RNA
②P蛋白基因與pET載體質(zhì)粒構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-P
③pET載體質(zhì)粒
（3）為了鑒定重組質(zhì)粒pET-P-β是否構(gòu)建成功，NdeⅠ和XhoⅠ酶分別對(duì)重組質(zhì)粒pET-P-β和pET載體質(zhì)粒進(jìn)行酶切，然后酶切片段和重組P蛋白基因進(jìn)行電泳，請(qǐng)將你判斷的電泳結(jié)果畫(huà)到表中對(duì)應(yīng)的泳道上。

DNA標(biāo)記	P-β	pET	pET-P-β

（4）想要獲得目的蛋白，需要將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-P-β、pET-P和pET分別轉(zhuǎn)入用

Ca²⁺（CaCl₂）

Ca²⁺（CaCl₂）

處理的成為感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞，培養(yǎng)處理后提取蛋白質(zhì)。過(guò)程如下：
若干健康小鼠隨機(jī)分為3組，將提取的蛋白質(zhì)分別溶于PBS緩沖液，對(duì)小鼠進(jìn)行皮下免疫，并對(duì)4次免疫后的血清進(jìn)行不同梯度稀釋，用

β蛋白

β蛋白

（β蛋白/P蛋白）作為抗原，通過(guò)免疫法檢測(cè)重組P-β蛋白的免疫原性。如圖2所示，請(qǐng)據(jù)圖描述出能夠表明P-β蛋白可以在小鼠體內(nèi)引起免疫反應(yīng)，具有特異的免疫原性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。