新冠病毒在人體細(xì)胞表面蛋白受體由ACE2控制表達(dá)，該基因的開放閱讀框（mRNA 從起始密碼子到終止密碼子之間的核苷酸序列）cDNA序列大小為2418bp（bp表示堿基對(duì)），在280bp和1070bp位點(diǎn)分別有一個(gè)HindⅢ和Xho I酶切位點(diǎn)（圖1）。甲、乙兩位同學(xué)通過分子生物學(xué)方法克隆該基因到 pMD18-T載體（圖2）中，各自的測(cè)序結(jié)果如圖4，并進(jìn)一步通過雙酶切獲得ACE2基因編碼序列與pEGFP-N1（圖2）載體重組（MCS多酶切位點(diǎn)序列如圖3所示）并表達(dá)。試分析回答下列問題：
（1）根據(jù)圖2可知，兩種載體都具有的基本結(jié)構(gòu)有 復(fù)制原點(diǎn)復(fù)制原點(diǎn)和 標(biāo)記基因標(biāo)記基因限制酶切割位點(diǎn)。
（2）ACE2基因與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)化后細(xì)胞需要在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基中篩選的原因是 載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr。
（3）甲、乙兩位同學(xué)均得到ACE2基因的PCR產(chǎn)物與pMD18-T載體的重組質(zhì)粒，針對(duì)ACE2基因的部分測(cè)序結(jié)果如圖4，并進(jìn)一步利用圖4中標(biāo)記的限制酶進(jìn)行雙酶切，獲得ACE2基因編碼序列，同時(shí)用相同限制酶酶切 pEGFP-N1載體，然后構(gòu)建重組質(zhì)粒。兩位同學(xué)對(duì)獲得的重組質(zhì)粒進(jìn)行酶切檢測(cè)：①甲同學(xué)只得到空載體；②乙同學(xué)在重組質(zhì)粒中檢測(cè)到了1348 bp 部分目的基因片段。請(qǐng)對(duì)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析：
①甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒。
②乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp,ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】復(fù)制原點(diǎn)；標(biāo)記基因；載體上含有氨芐青霉素抗性基因Ampr；甲同學(xué)用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒后，5’端均突出—GATC，產(chǎn)生相同的黏性末端，載體pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ兩種限制酶雙酶切后，可以自連，很難在連接體系中與其他DNA片段形成重組質(zhì)粒；乙同學(xué)用XhoⅠ和BamHⅠ兩種限制酶酶切ACE2與pMD18-T載體構(gòu)建的重組質(zhì)粒。已知ACE2基因編碼序列含有2418bp，ACE2基因在開放閱讀框1070bp處還有一個(gè)XhoⅠ酶切位點(diǎn)，酶切后便可以得到一個(gè)1348bp（2418—1070=1348）的大片段與載體pEGFP-N1雙酶切后的大片段連接構(gòu)建重組質(zhì)粒
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：1引用：1難度：0.6
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對(duì)目的基因進(jìn)行篩選。
（3）培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程（填序號(hào)）。過程②③采用的方法是。
（4）⑤過程需要用到等植物激素，在誘導(dǎo)愈傷組織分化成幼苗的過程中，這兩種植物激素的比例會(huì)發(fā)生變化，原因是。發(fā)布：2024/12/20 2:30:1組卷：16引用：5難度：0.5 -
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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