科研人員獲取了PHB2蛋白的基因編碼序列(簡稱phb2基因),利用基因工程的方法使大腸桿菌表達(dá)該蛋白,以便進(jìn)一步檢測PHB2蛋白抑制腫瘤細(xì)胞增殖和擴(kuò)散的效果。如圖1是phb2基因編碼區(qū)序列以及兩端需添加的、能被相關(guān)酶識別的序列,圖2為研究所用表達(dá)載體示意圖,表格為有關(guān)的限制酶種類及識別序列和切割位點(diǎn)?;卮鹣铝袉栴}:
限制酶種類 | SpeⅠ | PvitⅡ | BamHⅠ | XbaⅠ |
識別序列 | 5'A↓CTAGT3′ | 5'CAG↓CTG3′ | 5'G↓GATCC3′ | 5'T↓CTAGA3′ |
5'端
5'端
(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶識別序列。據(jù)圖可推斷,擴(kuò)增α鏈時(shí)需添加的限制酶識別序列以及所用引物的堿基序列是5'CAGCTGTCATTT
CAGCTGTCATTT
3'。已知AUG為PHB2蛋白合成的起始密碼子,則構(gòu)建符合要求的表達(dá)載體所用的工具酶有PvitⅡ、XbaⅠ、T4DNA連接酶
XbaⅠ、T4DNA連接酶
。(2)將符合要求的基因表達(dá)載體導(dǎo)入工程菌后,可用
抗原—抗體雜交
抗原—抗體雜交
技術(shù)檢測PHB2蛋白是否合成,通過提取、分離和純化,從發(fā)酵液中獲得該蛋白。為防止PHB2蛋白在工程菌細(xì)胞中被降解,在發(fā)醉過程中應(yīng)選用 蛋白酶
蛋白酶
缺陷型工程菌作為受體細(xì)胞,且在發(fā)酵結(jié)束后的純化過程中應(yīng)添加蛋白酶抑制劑。(3)腫瘤細(xì)胞通常培養(yǎng)在
95%的空氣和5%的CO2
95%的空氣和5%的CO2
(氣體及比例)的恒溫培養(yǎng)箱中,將適量PHB2蛋白加入培養(yǎng)液后,若腫瘤細(xì)胞 增殖速率減慢(或數(shù)量減少)、細(xì)胞膜上的糖蛋白減少
增殖速率減慢(或數(shù)量減少)、細(xì)胞膜上的糖蛋白減少
,則表明該蛋白具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖和擴(kuò)散作用,據(jù)此可進(jìn)一步地深入研究。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】5'端;CAGCTGTCATTT;XbaⅠ、T4DNA連接酶;抗原—抗體雜交;蛋白酶;95%的空氣和5%的CO2;增殖速率減慢(或數(shù)量減少)、細(xì)胞膜上的糖蛋白減少
【解答】
【點(diǎn)評】
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發(fā)布:2024/6/4 8:0:5組卷:7引用:2難度:0.6
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(1)獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有
(2)為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒,應(yīng)該選擇
(3)培育轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種的核心工作是圖中過程
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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