人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory syncytial virus,HRSV)是一種單鏈RNA病毒,如圖1是構(gòu)建人呼吸道合胞病毒基因組載體的示意圖,相關(guān)限制酶的識別序列及切割位點為:BclⅠ(T↓GATCA)、EcoRⅠ(G↓AATTC)、XbaⅠ(T↓CTAGA)、Sau3AⅠ(↓GATC)、BamHⅠ(G↓GATCC),請據(jù)圖回答:
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(1)HRSV的基因組為-RNA,入侵細胞后在 RNA復制酶RNA復制酶的催化下合成+RNA。被HRSV侵染的人體組織中易觀察到“多核細胞”的現(xiàn)象,請解釋此現(xiàn)象的可能成因 HRSV誘導了人體組織細胞的融合HRSV誘導了人體組織細胞的融合。此現(xiàn)象被科學家發(fā)現(xiàn)并應用于 單克隆抗體制備單克隆抗體制備(技術(shù))。
(2)在RT-PCR中添加的某逆轉(zhuǎn)錄酶能實現(xiàn)從單鏈RNA到雙鏈cDNA的合成過程,試推測該逆轉(zhuǎn)錄酶具有 ①②③①②③(①依賴于RNA的DNA聚合酶活性②RNaseH(RNA酶)活性③依賴于DNA的DNA聚合酶活性)等多種活性。HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶還有DNA內(nèi)切酶活性,試推測這可能與HIV侵染后 基因整合到宿主細胞染色體DNA,隨宿主DNA同步復制而穩(wěn)定遺傳基因整合到宿主細胞染色體DNA,隨宿主DNA同步復制而穩(wěn)定遺傳(生理過程)有關(guān)。
(3)過程③需要用 XbaⅠ、BclⅠXbaⅠ、BclⅠ兩種酶切割質(zhì)粒A。過程②設(shè)計引物時在兩種引物的5'端分別添加 XbaⅠ、BamHⅠXbaⅠ、BamHⅠ兩種酶的識別序列,酶切位點一般不能添加在引物的3'端的主要原因是 使引物的3端與模板鏈嚴格互補配對,保證子鏈的延伸使引物的3端與模板鏈嚴格互補配對,保證子鏈的延伸。
(4)為制備減毒突變株,科研人員將單個突變堿基引入HRSV基因組cDNA質(zhì)粒克隆中,流程如圖2。已知在細菌體內(nèi)合成的DNA分子有甲基化修飾,通過PCR擴增的DNA鏈無甲基化修飾。
①DpnI識別甲基化的GATC四個堿基序列,因此其能將圖中的 a、b鏈a、b鏈鏈水解消化掉,以留下帶突變堿基DNA鏈,其上缺刻(縫隙)在大腸桿菌細胞內(nèi)完成的修復需要 DNA連接酶DNA連接酶酶。
②若已知質(zhì)粒B為a個,經(jīng)過程①擴增15個循環(huán),需要突變引物 15a15a個,將過程②形成的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入大腸桿菌后復制n輪,得到雙鏈突變的DNA 15a-2n-115a-2n-1個。
【答案】RNA復制酶;HRSV誘導了人體組織細胞的融合;單克隆抗體制備;①②③;基因整合到宿主細胞染色體DNA,隨宿主DNA同步復制而穩(wěn)定遺傳;XbaⅠ、BclⅠ;XbaⅠ、BamHⅠ;使引物的3端與模板鏈嚴格互補配對,保證子鏈的延伸;a、b鏈;DNA連接酶;15a;15a-2n-1
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/8/29 6:0:11組卷:13引用:2難度:0.6
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