PCR技術(shù)于1985年誕生，應(yīng)用十分廣泛，幾乎包括生物技術(shù)的各個(gè)方面，例如：分離與擴(kuò)增目的基因，基因表達(dá)的研究，DNA測(cè)序以及基因診斷等?；卮鹣铝袉?wèn)題：

（1）PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是

已知一段目的基因的核苷酸序列

已知一段目的基因的核苷酸序列

，以便根據(jù)此前提合成引物，引物的作用是

使Taq酶能從引物的3'端連接脫氧核苷酸

使Taq酶能從引物的3'端連接脫氧核苷酸

以mRNA為模板進(jìn)行的特殊PCR技術(shù)，過(guò)程如圖1，該過(guò)程所需要的酶有

逆轉(zhuǎn)錄酶

逆轉(zhuǎn)錄酶

和

Taq酶

Taq酶

。
（2）一定濃度范圍內(nèi)，模板濃度與PCR產(chǎn)物的濃度呈正比。在RT-PCR過(guò)程中加入Taq Man探針，原理如圖2所示，Taq Man探針序列對(duì)應(yīng)待擴(kuò)增的目的基因的序列，在其5'端連接一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)（R），在其3'端連接一個(gè)淬滅熒光基因（Q），探針完整時(shí)，報(bào)告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)位置接近，發(fā)射的熒光被淬滅劑吸收，熒光強(qiáng)度很低。PCR過(guò)程中Taq酶從5'端切斷Taq Man探針，釋放熒光基團(tuán)。根據(jù)熒光強(qiáng)度可對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行定量分析，原理是

隨著PCR循環(huán)次數(shù)的增加，釋放的熒光基團(tuán)也會(huì)越多，熒光就會(huì)越強(qiáng)

隨著PCR循環(huán)次數(shù)的增加，釋放的熒光基團(tuán)也會(huì)越多，熒光就會(huì)越強(qiáng)

。根據(jù)PCR產(chǎn)物的濃度又可以估算

起始模板mRNA

起始模板mRNA

的濃度，以此代表目的基因在特定組織中的表達(dá)量。
（3）利用PCR技術(shù)，在引物的某個(gè)特定位點(diǎn)引入一個(gè)或多個(gè)不能與目的基因配對(duì)的堿基，就可以在目的基因中帶來(lái)定點(diǎn)突變，據(jù)此獲得的目的基因再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，該過(guò)程屬于

蛋白質(zhì)工程

蛋白質(zhì)工程

（填工程技術(shù)）的范疇。