人類γ基因啟動(dòng)子上游的調(diào)控序列中含有BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)，該位點(diǎn)結(jié)合BCL11A蛋白后，γ基因的表達(dá)被抑制。通過改變?cè)摻Y(jié)合位點(diǎn)的序列，解除對(duì)γ基因表達(dá)的抑制，可對(duì)某種地中海貧血癥進(jìn)行基因治療。科研人員擴(kuò)增了γ基因上游不同長(zhǎng)度的片段，將這些片段分別插入表達(dá)載體中進(jìn)行轉(zhuǎn)化和熒光檢測(cè)，以確定BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)的具體位置。相關(guān)信息如圖所示。
（1）圖中啟動(dòng)子是 RNA聚合酶RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)，且啟動(dòng)子是具有方向性的，目的基因只有正確插入啟動(dòng)子和終止子之間才能正確表達(dá)。在表達(dá)載體中綠色熒光蛋白基因作為 標(biāo)記基因標(biāo)記基因，要使其成功表達(dá)，圖b中還缺啟動(dòng)子，請(qǐng)判斷即將插入的啟動(dòng)子方向 向左向左（填“向左”或“向右”）。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增γ基因上游不同DNA片段的原理是 DNA雙鏈復(fù)制DNA雙鏈復(fù)制，為使PCR反應(yīng)體系中的模板解鏈為單鏈，需要滿足的條件是 加熱至90-95℃加熱至90-95℃。
（3）將擴(kuò)增后的產(chǎn)物定向插入載體指導(dǎo)綠色熒光蛋白基因表達(dá)，需要在引物末端添加限制酶識(shí)別序列。據(jù)圖可知，在R末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶應(yīng)為 EcoRIEcoRI，在F1～F7末端添加的序列所對(duì)應(yīng)的限制酶是 SalISalI。
（4）從產(chǎn)物擴(kuò)增到載體構(gòu)建完成的整個(gè)過程中，除限制酶外，還必須用到的工具酶有DNA連接酶和 耐高溫的DNA聚合酶耐高溫的DNA聚合酶。
（5）將構(gòu)建的載體導(dǎo)入除去BCL11A基因的受體細(xì)胞，成功轉(zhuǎn)化后，含F(xiàn)1～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的載體表達(dá)熒光蛋白，受體細(xì)胞有熒光，含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光。含F(xiàn)7與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞無熒光的原因是 F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動(dòng)子，熒光蛋白基因不表達(dá)F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動(dòng)子，熒光蛋白基因不表達(dá)。
（6）向培養(yǎng)液中添加適量的雌激素，含F(xiàn)1～F4與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞不再有熒光，而含F(xiàn)5～F6與R擴(kuò)增產(chǎn)物的受體細(xì)胞仍有熒光。若γ基因上游調(diào)控序列上與引物序列所對(duì)應(yīng)的位置不含有BCL11A蛋白的結(jié)合位點(diǎn)序列，據(jù)此結(jié)果可推測(cè)，BCL11A蛋白結(jié)合位點(diǎn)位于 引物F4與F5在調(diào)控序列上所對(duì)應(yīng)序列之間的區(qū)段上引物F4與F5在調(diào)控序列上所對(duì)應(yīng)序列之間的區(qū)段上。
【答案】RNA聚合酶；標(biāo)記基因；向左；DNA雙鏈復(fù)制；加熱至90-95℃；EcoRI；SalI；耐高溫的DNA聚合酶；F7與R擴(kuò)增產(chǎn)物不含完整的啟動(dòng)子，熒光蛋白基因不表達(dá)；引物F4與F5在調(diào)控序列上所對(duì)應(yīng)序列之間的區(qū)段上
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/15 8:0:8組卷：31引用：2難度：0.4
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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