Cre/loxP重組酶系統(tǒng)是對轉基因受體細胞DNA上的特定序列進行定點切割和重新連接，從而在基因或染色體水平上對生物基因進行遺傳改造的一種技術。請回答下列問題：
（1）loxP具有方向性，結構如圖1所示，其中決定方向的序列是②②（填序號）。
（2）Cre酶能催化如圖2所示的反應，隨機識別DNA分子上同向排列的兩個相同的loxP序列并在圖1的②中特定位點切斷DNA雙鏈，切口被重新連接后，保留片段22，從而實現目標基因的敲除。若經Cre酶作用使得2個loxP位點間的序列發(fā)生反轉，其原因可能是兩個loxP序列方向相反兩個loxP序列方向相反。
（3）Cre/loxP重組酶系統(tǒng)可以調控基因的表達，在目的基因上游上游（填“上游”或“下游”）插入一個帶有l(wèi)oxP位點的編碼終止密碼子的序列，在Cre酶存在的情況下，目的基因表達表達（填“表達”或“不表達”）。
（4）在轉基因煙草的制備過程中，通常用農桿菌轉化農桿菌轉化法把攜帶抗蟲基因的重組質粒導入煙草細胞，經檢測導入成功后，標記基因如抗除草劑基因即失去用途，可用Cre/loxP重組酶系統(tǒng)將標記基因敲除，其繼續(xù)留在煙草體內可能會引發(fā)的生物環(huán)境安全問題是抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染。
（5）GUS基因編碼的酶可將無色底物生成藍色產物，GFP基因會產生綠色熒光蛋白，這兩種基因都可作為標記基因，配合Cre/loxP重組酶系統(tǒng)來研究發(fā)育生物學的問題。
①構建基因表達載體時，可用限制酶和DNA連接限制酶和DNA連接酶將loxP序列、GUS基因及GFP基因連接，接上35S啟動子之后可在組織中檢測出藍色區(qū)而無綠色熒光區(qū)（如圖3所示），這是由于GFPGFP基因自身無啟動子而無法表達。
②Cre基因經38℃熱處理后可被激活表達，在此前提下組織中可檢測出綠色熒光區(qū)，據此分析綠色熒光區(qū)形成的原因是Cre重組酶能（特異性識別并）切割loxP序列，使GFP基因得以表達Cre重組酶能（特異性識別并）切割loxP序列，使GFP基因得以表達，采用延長熱處理時間延長熱處理時間等手段可以擴大組織中綠色熒光區(qū)的面積。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】②；2；兩個loxP序列方向相反；上游；表達；農桿菌轉化；抗除草劑基因可能轉移到雜草中，造成基因污染；限制酶和DNA連接；GFP；Cre重組酶能（特異性識別并）切割loxP序列，使GFP基因得以表達；延長熱處理時間
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：64引用：5難度：0.5
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