α-抗胰蛋白酶是一種主要由肝細(xì)胞合成的血漿蛋白，具有維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的功能?？蒲腥藛T利用乳腺生物反應(yīng)器獲得了α-抗胰蛋白酶。回答下列問題：
（1）將人正常干細(xì)胞系L-02培養(yǎng)在某動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。CO2的主要作用是 維持培養(yǎng)液的pH值維持培養(yǎng)液的pH值。待細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長末期，用 胰蛋白胰蛋白酶消化，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和離心收集，提取RNA，經(jīng) 逆轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄（填過程）最終獲得α-抗胰蛋白酶基因。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α-抗胰蛋白酶基因時(shí)，科研人員在兩個(gè)引物的 5'端5'端（填“5'端”或“3'端”）各添加一種限制酶的酶切位點(diǎn)，在該端添加的理由是 DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端。α-抗胰蛋白酶基因兩端添加不同的限制酶切割位點(diǎn)的目的是 防止自身連接環(huán)化防止自身連接環(huán)化。
（3）將α-抗胰蛋白酶基因與牛乳腺中 乳蛋白乳蛋白的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，構(gòu)建成基因表達(dá)載體。若將α-抗胰蛋白酶基因直接導(dǎo)入牛受精卵中，往往不能獲得所需的轉(zhuǎn)基因牛，理由是 直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會(huì)被降解或不能表達(dá)直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會(huì)被降解或不能表達(dá)。
（4）將含基因表達(dá)載體的受精卵置于早期胚胎培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，早期胚胎進(jìn)行移植前，需進(jìn)行性別鑒定。性別鑒定的操作思路是 取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定。
（5）轉(zhuǎn)基因牛成年后需對(duì)其α-抗胰蛋白酶基因的表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行檢測，一般采用 抗原—抗體雜交抗原—抗體雜交法。
【答案】維持培養(yǎng)液的pH值；胰蛋白；逆轉(zhuǎn)錄；5'端；DNA復(fù)制方向是由5'端到3'端；防止自身連接環(huán)化；乳蛋白；直接將其導(dǎo)入受體細(xì)胞，很可能會(huì)被降解或不能表達(dá)；取囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞做DNA分析性別鑒定；抗原—抗體雜交
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：1引用：2難度：0.6
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1．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)是細(xì)胞工程的基本技術(shù)，下列關(guān)于這兩項(xiàng)技術(shù)的敘述，正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：29引用：2難度：0.7 -
2．據(jù)國際糖尿病聯(lián)盟最新數(shù)據(jù)，2021年全球約5.37億成人患有糖尿病，670萬成人因糖尿病或其并發(fā)癥死亡。如圖是研究人員提出的治療方案，請回答下列問題：
（1）從患者體內(nèi)獲得體細(xì)胞后，對(duì)其進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱為，培養(yǎng)的細(xì)胞在貼壁生長至鋪滿培養(yǎng)皿底時(shí)停止分裂，這種現(xiàn)象稱為。一般來說，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要的條件有（少答出兩點(diǎn)）。
（2）利用PCR技術(shù)擴(kuò)增正常胰島素基因的前提條件是。目前臨床用的胰島素生效較慢，科學(xué)家將胰島素β鏈的第28和29個(gè)氨基酸調(diào)換順序，成功獲得了速效胰島素。生產(chǎn)速效胰島素，需要對(duì)進(jìn)行定向改造。
A.胰島素
B.胰島素mRNA
C.胰島素基因
D.胰島
（3）欲檢測胰島類似細(xì)胞是否具有胰島B細(xì)胞的正常生理功能，可設(shè)計(jì)如下實(shí)驗(yàn)：將等量的胰島類似細(xì)胞與正常胰島B細(xì)胞分別加入兩組相等濃度的培養(yǎng)液中，適宜且相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一段時(shí)間后分別檢測兩組培養(yǎng)液中。
（4）該治療糖尿病的方法與異體移植相比，突出的優(yōu)點(diǎn)是。發(fā)布：2024/12/31 2:30:2組卷：35引用：2難度：0.6 -
3．新型抗腫瘤藥物Y具有見效快、機(jī)體不易對(duì)該藥產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)。某研究小組以小鼠肝腫瘤細(xì)胞（甲）和正常肝細(xì)胞（乙）為材料進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請回答下列問題：
（1）實(shí)驗(yàn)時(shí)，需先將小鼠的肝組織切碎，然后利用處理肝組織塊，使其分散成單個(gè)細(xì)胞，然后制成細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)。用于實(shí)驗(yàn)的肝組織塊一般應(yīng)從幼齡小鼠獲取，原因是幼齡小鼠肝組織的，易于培養(yǎng)。
（2）在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，除營養(yǎng)、溫度、pH、滲透壓、氣體環(huán)境等要符合條件外，培養(yǎng)液中還應(yīng)添加一定量的抗生素，其目的是，避免培養(yǎng)的動(dòng)物細(xì)胞被細(xì)菌侵害。
（3）若要選取一定量的肝組織細(xì)胞檢測藥物Y對(duì)小鼠正常肝細(xì)胞（乙）的毒性，是否適合選用原代培養(yǎng)的細(xì)胞？。請作簡要解釋：。
（4）已知肝細(xì)胞中X基因的過量表達(dá)與肝腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，若要檢測藥物Y的療效，應(yīng)該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)？請寫出實(shí)驗(yàn)的主要思路：。發(fā)布：2024/12/31 1:30:1組卷：9引用：3難度：0.6
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