某種病毒為單股正鏈RNA病毒。某科研團(tuán)隊經(jīng)原核表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)了該種病毒的包膜E蛋白，用于該種病毒的檢測、單克隆抗體的制備以及基因工程疫苗的研發(fā)等。如圖為所用載體的示意圖，其中EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ和BamHⅠ四種限制酶切割形成的末端均不相同，且酶切效率均達(dá)不到100%?；卮鹣铝袉栴}：
（1）擴(kuò)增E蛋白基因采用的RT-PCR法包括反轉(zhuǎn)錄和PCR兩步，該方法需要提取病毒的 RNARNA作為反轉(zhuǎn)錄的模板，在反轉(zhuǎn)錄和PCR過程中使用的酶分別為 反轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶反轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶。
（2）已知該種病毒的E蛋白基因在內(nèi)部及兩側(cè)沒有限制酶對應(yīng)的序列，設(shè)計PCR引物時需要 在兩種引物的5'端分別添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的識別序列在兩種引物的5'端分別添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的識別序列，以保證目的基因與載體正確連接。
（3）酶切后的E蛋白基因和載體在 DNA連接酶DNA連接酶的作用下構(gòu)成基因表達(dá)載體，導(dǎo)入經(jīng)Ca2+處理過的大腸桿菌，然后將上述大腸桿菌培養(yǎng)在含 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基上，在該培養(yǎng)基上生長的大腸柑橘不都含有E蛋白基因，原因是 能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌，一種導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒，一種導(dǎo)入的是含E基因的重組質(zhì)粒能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌，一種導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒，一種導(dǎo)入的是含E基因的重組質(zhì)粒。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】RNA；反轉(zhuǎn)錄酶和Taq酶；在兩種引物的5'端分別添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的識別序列；DNA連接酶；卡那霉素；能在含卡那霉素的培養(yǎng)基上生長的大腸桿菌，一種導(dǎo)入的是普通質(zhì)粒，一種導(dǎo)入的是含E基因的重組質(zhì)粒
【解答】
【點評】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：1難度：0.5
相似題
-
1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
相關(guān)試卷