三氯生是一種抑癌物質(zhì)，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細胞。2021年某科研團隊通過先篩選出一種對三氯生抵抗性較強的重組質(zhì)粒，再將可以受溫度調(diào)控的基因插入該質(zhì)粒上，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達質(zhì)粒。
（1）圖1中，步驟Ⅰ需要的工具酶是 限制酶限制酶；步驟Ⅱ常用的方法是用 Ca2+Ca2+處理使細菌成為感受態(tài)細胞；為達到步驟Ⅲ預(yù)期的篩選目的，所用物質(zhì)X最可能為 三氯生三氯生。
（2）已知fabV基因 （-A和-B代表從不同苗中獲得） 可以使大腸桿菌抵抗三氯生。在圖中，fabV-A基因和fabV-B基因是 目的目的（目的/標記）基因。
（3）利用從細菌中提取的DNA通過PCR技術(shù)獲取fabV-A基因時，需要的特定酶是 Taq酶Taq酶，該酶只能從 引物的3'端引物的3'端延伸DNA鏈，而不能從頭開始合成DNA，因此需要先根據(jù) 目的基因fabV-B基因兩端序列目的基因fabV-B基因兩端序列設(shè)計兩種特異性引物序列。
（4）為獲得一種增強大腸桿菌對三氯生的抵抗作用效果較好的重組質(zhì)粒，將含有不同質(zhì)粒的大腸桿菌分別接種到相應(yīng)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)一段時間后，結(jié)果如圖2，則適宜選作構(gòu)建溫度調(diào)控表達質(zhì)粒的是 pEApEA。
（5）科學家對上述選出質(zhì)粒進行改造，獲得了圖3所示質(zhì)粒。其中P1和P2是啟動子，可以啟動轉(zhuǎn)錄；C基因在低溫下會抑制P1；R基因在高溫下會抑制P2；T1和T2是終止子，可以終止轉(zhuǎn)錄。如果將lacZ基因和GFP基因插入圖質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為高溫下只表達GFP蛋白，而低溫下只表達lacZ蛋白。則以下說法正確的有 ADAD。（多選）
A.GFP基因插在R基因和終止子T1之間
B.lacZ基因插在R基因和終止子T1之間
C.GFP基因插在啟動子P2和終止子T2間
D.lacZ基因插在啟動子P2和終止子T2之間
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】限制酶；Ca2+；三氯生；目的；Taq酶；引物的3'端；目的基因fabV-B基因兩端序列；pEA；AD
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：49引用：1難度：0.3
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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