基因表達(dá)載體的構(gòu)建是基因工程的核心。圖中甲為限制酶EcoRI的識(shí)別序列,圖乙表示目的基因及限制酶切點(diǎn),圖丙表示目的基因上的DNA片段,圖丁表示質(zhì)粒。請(qǐng)回答下列問題:
(1)從供體真核生物的某組織中獲取mRNA,并以此為模板反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生多種片段,與載體連接后儲(chǔ)存在一個(gè)受體菌群中,該受體菌群體叫 cDNAcDNA文庫,從該文庫中獲得的目的基因 不含不含(填“含”或“不含”)啟動(dòng)子、終止子、內(nèi)含子。
(2)若用圖甲所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA,就其專一性而言,切開的是G和A所在的兩個(gè)核苷酸之間的 磷酸二酯磷酸二酯鍵,即圖丙的 ②②處。
(3)為了使目的基因和質(zhì)粒定向連接,并且有利于受體細(xì)胞的篩選,提高重組效率,應(yīng)該選擇的限制酶是PstI和 EcoRIEcoRI,如果大腸桿菌是受體細(xì)胞,則其體內(nèi)應(yīng)不含 抗卡那霉素抗卡那霉素基因,以利于篩選出含質(zhì)粒的受體菌。
(4)PCR技術(shù)擴(kuò)增圖乙中的目的基因時(shí),需要提供模板、dNTP、Taq酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)Taq酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶)、引物A和引物 DD等條件。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合.
【答案】cDNA;不含;磷酸二酯;②;EcoRI;抗卡那霉素;Taq酶(熱穩(wěn)定DNA聚合酶);D
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:4引用:1難度:0.6
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 發(fā)布:2024/12/20 3:30:1組卷:6引用:1難度:0.6
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