新冠病毒處于不斷的變異中，為了增強(qiáng)疫苗接種的有效性，科研人員擬將新冠病毒的S、N及E蛋白的主要抗原信息片段串聯(lián)成融合蛋白作為疫苗的有效成分，如圖為其研發(fā)思路。圖中①-⑤表示過程，表中為四種限制酶的識(shí)別序列。
| 限制酶 | NcoⅠ | SphⅠ | BamHⅠ | NheⅠ |
| 識(shí)別序列和切割位點(diǎn) | C↓CATGG | GCATG↓C | G↓CTAGC | G↓GATCC |
cDNA
cDNA
序列，利用化學(xué)合成的方法得到目的基因，即融合基因，再使用 PCR
PCR
技術(shù)擴(kuò)增該基因。（2）圖中①過程為
構(gòu)建基因表達(dá)載體
構(gòu)建基因表達(dá)載體
，需先使用限制酶 NcoⅠ和NheⅠ
NcoⅠ和NheⅠ
切割質(zhì)粒pET-28a,相較于用同一種限制酶切，用兩種限制酶切的優(yōu)點(diǎn)是 防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接
。（3）步驟②中用Ca2+處理大腸桿菌，然后將轉(zhuǎn)化后的菌液涂布于含
氨芐青霉素
氨芐青霉素
的培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基長出的菌落 是
是
（選填“是”或“不是”或“不一定是”）導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌。（4）可利用
抗原抗體雜交
抗原抗體雜交
法檢測該融合蛋白基因是否轉(zhuǎn)錄。（5）利用大腸桿菌表達(dá)融合蛋白，可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模、高產(chǎn)量制備，但缺點(diǎn)是需要對獲得的蛋白質(zhì)進(jìn)行體外加工，從細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能角度分析，原因是大腸桿菌
是原核生物，無細(xì)胞器對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
是原核生物，無細(xì)胞器對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
。【考點(diǎn)】基因工程的操作過程綜合．
【答案】cDNA；PCR；構(gòu)建基因表達(dá)載體；NcoⅠ和NheⅠ；防止目的基因自身環(huán)化，防止目的基因與質(zhì)粒反向連接；氨芐青霉素；是；抗原抗體雜交；是原核生物，無細(xì)胞器對蛋白質(zhì)進(jìn)行加工
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：6引用：1難度：0.5
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發(fā)布：2024/12/20 5:0:2組卷：35引用：5難度：0.6 -
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（1）獲得轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草新品種過程中應(yīng)用的生物技術(shù)有（答出2項(xiàng)）等。
（2）為確保目的基因定向插入了質(zhì)粒，應(yīng)該選擇（填酶）切割目的基因和質(zhì)粒。在培養(yǎng)基中加入（填“氨芐青霉素”或“四環(huán)素”）對目的基因進(jìn)行篩選。
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限制酶 BamHⅠ EcoRⅠ HindⅠ NbeⅠ MunⅠ 識(shí)別序列及切割位點(diǎn) G↓CATCC G↓AATTC A↓AGCTT G↓CTAGC C↓AATTG 
發(fā)布：2024/12/20 3:30:1組卷：6引用：1難度：0.6
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