dMAb技術(shù)是一種通過DNA編碼產(chǎn)生單克隆抗體的技術(shù),比傳統(tǒng)單克隆抗體制備方法更有發(fā)展?jié)摿?。此前發(fā)表的研究顯示,以埃博拉病毒為目標(biāo)且高度優(yōu)化的基于DNA的單克隆抗體,單次給藥在小鼠血液中產(chǎn)生了高水平的抗體表現(xiàn)。如圖表示dMAb技術(shù)在埃博拉病毒感染疾病的臨床研究中的操作流程?;卮鹣铝袉栴}:
(1)根據(jù)抵御埃博拉病毒的抗體的結(jié)構(gòu)獲得目的基因,常用PCR技術(shù)快速擴增目的基因。在擴增過程中,需要的原料是 4種脫氧核苷酸4種脫氧核苷酸,將溫度控制在90℃以上的目的是 使DNA的雙鏈解旋成單鏈使DNA的雙鏈解旋成單鏈。
(2)構(gòu)建重組質(zhì)粒時,一般用相同的限制酶切割目的基因和Ti質(zhì)粒的脫氧核苷酸片段,目的是 產(chǎn)生相同的黏性末端,以便構(gòu)建基因表達載體產(chǎn)生相同的黏性末端,以便構(gòu)建基因表達載體。重組質(zhì)粒中含有啟動子,其作用是 作為RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA作為RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA。
(3)單克隆抗體與埃博拉病毒結(jié)合利用的原理是 抗原與抗體特異性結(jié)合抗原與抗體特異性結(jié)合。利用動物細胞融合技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體時,經(jīng)選擇性培養(yǎng)基篩選出的雜交瘤細胞還需要進行抗體檢測,其目的是 獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞。與傳統(tǒng)利用雜交瘤細胞生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)相比,dMAb技術(shù)的優(yōu)勢是 抗體的產(chǎn)生在生物體內(nèi)進行,不需要進行細胞體外培養(yǎng);產(chǎn)生抗體的細胞種類不局限于免疫細胞(漿細胞);可制備成DNA“疫苗”,便于存儲和運輸;抗體直接由DNA編碼產(chǎn)生,省去反復(fù)用抗原刺激免疫細胞再細胞融合和篩選的步驟抗體的產(chǎn)生在生物體內(nèi)進行,不需要進行細胞體外培養(yǎng);產(chǎn)生抗體的細胞種類不局限于免疫細胞(漿細胞);可制備成DNA“疫苗”,便于存儲和運輸;抗體直接由DNA編碼產(chǎn)生,省去反復(fù)用抗原刺激免疫細胞再細胞融合和篩選的步驟(寫出2點)。
【答案】4種脫氧核苷酸;使DNA的雙鏈解旋成單鏈;產(chǎn)生相同的黏性末端,以便構(gòu)建基因表達載體;作為RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位,能驅(qū)動目的基因轉(zhuǎn)錄出mRNA;抗原與抗體特異性結(jié)合;獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞;抗體的產(chǎn)生在生物體內(nèi)進行,不需要進行細胞體外培養(yǎng);產(chǎn)生抗體的細胞種類不局限于免疫細胞(漿細胞);可制備成DNA“疫苗”,便于存儲和運輸;抗體直接由DNA編碼產(chǎn)生,省去反復(fù)用抗原刺激免疫細胞再細胞融合和篩選的步驟
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/6/27 10:35:59組卷:31引用:2難度:0.7
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1.學(xué)習(xí)以下材料,回答(1)~(4)題。
利用抑制性tRNA進行無義突變遺傳病的治療
無義突變是由于某個堿基的改變使代表某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止密碼子(UAA、UAG或UGA),從而使肽鏈合成提前終止,造成蛋白質(zhì)的功能改變,引發(fā)相關(guān)疾病。約有10%~15%的人類基因相關(guān)遺傳疾病是由無義突變引發(fā)的。常規(guī)的基因治療是將正?;虻腸DNA序列或是有治療價值的基因(如CRISPR-Cas9相關(guān)的基因編輯工具)通過一定的方式導(dǎo)入人體靶細胞內(nèi),達到替代或修復(fù)缺陷基因、治療疾病的目的。導(dǎo)入基因插入位置不當(dāng)、過高或過低表達,都可能會導(dǎo)致副作用。盡管基因編輯可以實現(xiàn)生理水平的基因表達,但基因編輯工具引入外源蛋白可能引發(fā)強烈的免疫反應(yīng)仍然是巨大的挑戰(zhàn)。
抑制性tRNA(sup-tRNA)由天然tRNA改造而來,它的反密碼子通過堿基配對原則可以識別無義突變的終止密碼子,使得mRNA在翻譯至無義突變位點時不啟動翻譯終止而是繼續(xù)向后進行翻譯,獲得有功能的全長蛋白。
I型黏多糖貯積癥的病因,是相關(guān)基因發(fā)生無義突變,產(chǎn)生終止密碼子UAG。研究者構(gòu)建小鼠該突變基因mldua和Flag基因融合的載體(圖1),以及針對該無義突變設(shè)計的sup-tRNA表達載體(產(chǎn)生的sup-tRNA能夠識別UAG并攜帶酪氨酸Tyr,簡寫作sup-tRNATyr),將其導(dǎo)入細胞進行研究,發(fā)現(xiàn)與具有相似作用的化合物G418比較,sup--tRNA的作用更加顯著(圖2);進一步利用重組腺相關(guān)病毒作為載體將sup-tRNA導(dǎo)入患病小鼠模型中,實驗顯示能夠降低黏多糖過度積存,實現(xiàn)對該病癥的有效治療,其療效可以持續(xù)半年以上。
從整體來看,G418在促進跨越無義突變位點繼續(xù)翻譯時引入的氨基酸較為隨機,而sup-tRNA引入的氨基酸較為單一,且不會影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài),所以sup-tRNA在個體治療中具有很高的安全性,因而在未來基因突變引起的疾病相關(guān)治療中具有非常大的應(yīng)用前景。
(1)侵染時,作為載體的重組腺相關(guān)病毒與靶細胞膜上的
(2)除了引入的氨基酸較為單一,不影響內(nèi)源tRNA穩(wěn)態(tài),我們還可推斷,用于治療的sup-tRNA在正常終止密碼子處
(3)研究者構(gòu)建mldua突變基因和Flag基因融合的載體,目的是通過檢測
(4)有文獻報道,已在近1000個不同的人類基因中發(fā)現(xiàn)了7500多個無義突變。常規(guī)的基因治療需要為每種疾病設(shè)計獨特的治療策略,這將是一項耗費驚人的項目。據(jù)此說明sup-tRNA的應(yīng)用價值。發(fā)布:2025/1/3 8:0:1組卷:26引用:1難度:0.6 -
2.人類基因組計劃測定了人體的24條染色體,這24條染色體是( )
發(fā)布:2024/12/31 0:30:1組卷:112引用:7難度:0.7 -
3.幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分,自然界有些植物能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶催化幾丁質(zhì)水解從而抵抗真菌感染。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入沒有抗性的植物體內(nèi),可增強其抗真菌的能力。如圖表示為獲取幾丁質(zhì)酶基因而建立cDNA文庫的過程。
(1)圖示以mRNA為材料通過
(2)與選用老葉相比,選用嫩葉更容易提取到mRNA,原因是
(3)將從cDNA文庫中獲得的幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體用發(fā)布:2025/1/5 8:0:1組卷:5引用:1難度:0.7
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