重組酵母乙肝疫苗是一種乙肝表面抗原(HBsAg)亞單位疫苗,如圖表示生產(chǎn)疫苗的過程。P質(zhì)粒上有啟動子E和終止子F,并含有多種限制酶(BglⅡ、SacⅠ、SnaBⅠ、AvrⅡ)的識別序列。H序列可將DNA片段整合到某酵母菌染色體中以實現(xiàn)表達。
(1)為確保目的基因能正確插入質(zhì)粒,設(shè)計引物時HBsAg基因兩側(cè)A和B位置應(yīng)考慮包含 SnaBⅠ和AvrⅡSnaBⅠ和AvrⅡ限制酶識別序列。構(gòu)建重組質(zhì)粒的工具酶是 限制酶和DNA連接酶限制酶和DNA連接酶重組質(zhì)粒需有 復(fù)制原點復(fù)制原點確保其能在大腸桿菌中復(fù)制。
(2)啟動子E嚴格地受甲醇的誘導(dǎo),調(diào)控外源基因表達。為篩選重組酵母細胞并使目的基因大量表達,則該酵母菌培養(yǎng)基中需要加入 甲醇、卡那霉素甲醇、卡那霉素。
(3)圖中步驟1將重組P質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是 獲得大量HBsAg基因(獲得大量重組Р質(zhì)粒)獲得大量HBsAg基因(獲得大量重組Р質(zhì)粒),不直接利用大腸桿菌生產(chǎn)疫苗的原因可能是 大腸桿菌是原核細胞,缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工(或“大腸桿菌無法正常轉(zhuǎn)錄目的基因”或“大腸桿菌無法正常表達目的基因”)大腸桿菌是原核細胞,缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工(或“大腸桿菌無法正常轉(zhuǎn)錄目的基因”或“大腸桿菌無法正常表達目的基因”)。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】SnaBⅠ和AvrⅡ;限制酶和DNA連接酶;復(fù)制原點;甲醇、卡那霉素;獲得大量HBsAg基因(獲得大量重組Р質(zhì)粒);大腸桿菌是原核細胞,缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體對蛋白質(zhì)進行加工(或“大腸桿菌無法正常轉(zhuǎn)錄目的基因”或“大腸桿菌無法正常表達目的基因”)
【解答】
【點評】
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