葉綠體DNA（cpDNA）大多為環(huán)狀雙鏈，其基因組序列高度保守，目前已在分子標(biāo)記、核質(zhì)互作、葉綠體基因工程等方面開(kāi)展了廣泛研究。下列為提取cpDNA的相關(guān)步驟，其中SDS能瓦解生物膜，苯酚使蛋白質(zhì)變性析出，氯仿與苯酚互溶，易于除去苯酚。
（1）葉綠體的分離
①勻漿使細(xì)胞破碎；將葉片于4℃冰箱黑暗饑餓處理12～24h后，剪成1cm長(zhǎng)度，放入勻漿機(jī)，倒入緩沖液，先低速勻漿2次，再高速勻漿3次，每次5～10s。勻漿前黑暗饑餓處理的目的是

使葉綠體中的淀粉消耗掉

使葉綠體中的淀粉消耗掉

，有利于cpDNA的提取。
②離心得到葉綠體粗提物：將勻漿液過(guò)濾后離心，棄沉淀以去除細(xì)胞殘??；將得到的上清液再次離心，棄上清，即得葉綠體粗提物，第二次離心的速度比第一次

高

高

。整個(gè)過(guò)程中線粒體分布在

上清液

上清液

中，從而避免了線粒體DNA對(duì)cpDNA的污染。
（2）去除核DNA：向葉綠體粗提物中加入

DNA酶

DNA酶

、緩沖液，37℃靜置15min后，離心取

沉淀

沉淀

從而去除吸附在葉綠體外膜上的核DNA。
（3）葉綠體的裂解和cpDNA的粗提：將純化的葉綠體加入緩沖液、SDS、蛋白酶K，55℃水浴3h,使葉綠體裂解，釋放出cpDNA，離心取上清液。在上清液中加入苯酚和氯仿，離心后的液體包括上層水相、中層變性蛋白和下層有機(jī)溶劑，cpDNA分布于

上層水相

上層水相

中，小心用

移液槍（微量移液器）

移液槍（微量移液器）

吸取該層液體。
（4）沉淀cpDNA：向粗提溶液中加入3mol/L醋酸鈉及預(yù)冷的

95%酒精

95%酒精

，離心取沉淀物。
（5）電泳檢測(cè)cpDNA：右圖1、2是某品種茶樹(shù)用上述方法提取到的cpDNA凝膠電泳結(jié)果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。2組無(wú)條帶，表明提取不成功，其可能的原因之一是操作過(guò)程中葉綠體裂解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，導(dǎo)致

cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少

cpDNA片段斷裂或降解，所提取的cpDNA含量少

，
（6）葉綠體基因的遺傳方式

不遵循

不遵循

（填“遵循”或“不遵循”）孟德?tīng)栠z傳定律，不會(huì)隨傳給后代。且將外源基因轉(zhuǎn)入葉綠體基因時(shí)，在轉(zhuǎn)基因生物安全方面帶來(lái)的優(yōu)點(diǎn)為

花粉轉(zhuǎn)入的目的基因不會(huì)隨花粉飄散，污染近緣（其他）植物

花粉轉(zhuǎn)入的目的基因不會(huì)隨花粉飄散，污染近緣（其他）植物

。