現(xiàn)代生物技術(shù)。
脫氧核苷酸鏈是有方向的，一端為5'端，另一端為3'端，DNA分子兩條脫氧核苷酸鏈反向平行。DNA復(fù)制時，稱為引物的小段核苷酸鏈先與模板鏈配對結(jié)合，然后在引物的3'端進行子鏈延伸，在引物的5'端不能進行子鏈延伸（如圖1）。

（1）在圖1的數(shù)字編號①～③中，代表解旋過程的是

①

①

，此過程中發(fā)生斷裂的鍵是

氫鍵

氫鍵

。
聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）可自動化重復(fù)進行圖1所示的①～③步驟，每完成一次①～③步驟稱為完成一個循環(huán)，每個循環(huán)各步驟的反應(yīng)條件設(shè)計為：步驟①在94℃持續(xù)30秒，步驟②在55℃持續(xù)30秒，步驟③在72℃持續(xù)1分鐘。某研究小組擬用PCR技術(shù)和引物1、2從圖2所示DNA分子中擴增出編碼蛋白質(zhì)H的基因，并開展后續(xù)研究。

（2）下列關(guān)于PCR的敘述中，正確的是

C

C

。
A．PCR是檢測生物遺傳多樣性最可靠的方法
B．可從人體細胞提取DNA聚合酶用于PCR反應(yīng)
C．通過PCR擴增目的基因?qū)儆诨瘜W方法人工合成
D．若引物能與模板DNA多個位置結(jié)合，則可提高PCR擴增效率
（3）通過上述PCR反應(yīng)獲得目的基因片段后，擬將其插入質(zhì)粒pZHY1中構(gòu)建重組DNA分子pZHY2．已知在pZHY1上存在EcoRⅠ、BamHⅠ、KpnⅠ、XbaⅠ4種限制酶的識別序列（如表），則應(yīng)選用的限制酶組合是

B

B

。

EcoRⅠ	BamHⅠ	KpnⅠ	XbaⅠ
G↓AATTC CTTAA↑G	G↓GATCC CCTAG↑G	GGTAC↓C C↑CATGG	T↓CTAGA AGATC↑T

A．BamHⅠ和EcoRⅠ
B．BamHⅠ和KpnⅠ
C．EcoRⅠ和KpnⅠ
D．EcoRⅠ和XbaⅠ
（4）將重組DNA分子pZHY2導(dǎo)入大腸桿菌后，就可通過大規(guī)模培養(yǎng)大腸桿菌制備蛋白質(zhì)H．若要獲得純化的蛋白質(zhì)H，下列操作步驟中Ⅰ代表

①②

①②

，Ⅱ代表

④

④

。
破碎細胞→過濾一Ⅰ→Ⅱ→通過冷凍干燥結(jié)晶蛋白質(zhì)
①改變pH沉淀蛋白質(zhì)
②加入硫酸銨沉淀蛋白質(zhì)
③將蛋白質(zhì)進行固定化
④通過層析提純蛋白質(zhì)
（5）若要制備抗蛋白質(zhì)H的單克隆抗體，相關(guān)說法中正確的有

ACD

ACD

。（多選）
A．可以用上述步驟所得純化的蛋白質(zhì)H作為抗原免疫動物
B．從動物的脾臟收集B淋巴細胞，并使之與雜交瘤細胞融合
C．單克隆抗體是由單個雜交瘤細胞增殖產(chǎn)生的雜交瘤細胞群分泌的成分單一的抗體
D．從PCR擴增目的基因到制備單克隆抗體，共涉及基因工程、發(fā)酵工程、細胞工程