（一）草莓是春節(jié)市場(chǎng)上非常受歡迎的一種水果，但卻存在易腐爛，難保存的問(wèn)題。某科研團(tuán)隊(duì)為了確定腐爛草莓上的菌種類型和探究草莓的新產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)模式，進(jìn)行了以下一系列的研究。請(qǐng)回答：
（1）科研團(tuán)隊(duì)用棉簽刮取腐爛的草莓表面，然后用

無(wú)菌水

無(wú)菌水

沖洗棉簽獲得菌懸液，然后利用

稀釋涂布平板法/涂布分離

稀釋涂布平板法/涂布分離

法將其接種至LB固體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中出現(xiàn)了均勻分布的單菌落。
（2）腐爛的草莓非常軟爛，原因是微生物產(chǎn)生的

果膠酶

果膠酶

作用后使草莓組織更加松散。為了獲得使草莓變軟的微生物，用接種環(huán)分別刮取LB培養(yǎng)基上菌落的菌種，接種到

以果膠為唯一碳源的

以果膠為唯一碳源的

培養(yǎng)基上，發(fā)現(xiàn)了以下兩種情況：
①LB培養(yǎng)基中的菌落數(shù)量和種類更多，原因是

草莓腐爛處的微生物并非都能產(chǎn)生果膠酶

草莓腐爛處的微生物并非都能產(chǎn)生果膠酶

。
②后者培養(yǎng)基上的菌落與在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)時(shí)相比，生長(zhǎng)狀況不盡相同，可能原因是

菌種對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，導(dǎo)致生長(zhǎng)狀況不同

菌種對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求不同，導(dǎo)致生長(zhǎng)狀況不同

。
（3）科研團(tuán)隊(duì)為了制成草莓果酒，將草莓放入榨汁機(jī)制成黏稠的果醬，然后接種釀酒酵母進(jìn)行發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)酒精含量低，且極易造成污染?？梢詫⒐u進(jìn)行

稀釋和殺菌/滅菌

稀釋和殺菌/滅菌

處理后再用于發(fā)酵。
（二）某種植物的根會(huì)產(chǎn)生一種次生代謝產(chǎn)物，該次生代謝產(chǎn)物具有很高的藥用價(jià)值。在研究這種次生代謝產(chǎn)物合成的分子機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，基因A表達(dá)沉默時(shí)才能產(chǎn)生，且有物質(zhì)甲存在時(shí)會(huì)使基因A表達(dá)。物質(zhì)甲在環(huán)境中非常常見(jiàn)，為了實(shí)現(xiàn)基因A的沉默，現(xiàn)設(shè)計(jì)將基因A反向連接到植物基因組中?；駻與Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)如下圖所示，箭頭表示轉(zhuǎn)錄方向。

（4）為了使基因A反向連接到Ti質(zhì)粒上，選用EcoRI和BamHI酶進(jìn)行切割并分離獲得A基因，然后加入

DNA連接酶

DNA連接酶

形成重組Ti質(zhì)粒。為了保證重組Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌中的穩(wěn)定存在，需將工程發(fā)根農(nóng)桿菌進(jìn)行

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

處理。
（5）將含有重組T質(zhì)粒的發(fā)根農(nóng)桿菌與經(jīng)過(guò)創(chuàng)傷處理的外植體共同培養(yǎng)一段時(shí)間，然后進(jìn)行

除菌（不能填滅菌）

除菌（不能填滅菌）

后，在培養(yǎng)基中加入

潮霉素

潮霉素

以篩選出成功導(dǎo)入基因A片段的植物細(xì)胞。再轉(zhuǎn)移至含有

適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

的培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到愈傷組織。結(jié)果發(fā)現(xiàn)未更換培養(yǎng)基的情況下，就長(zhǎng)出了較多的根，可能原因是發(fā)根農(nóng)桿菌的T-DNA中含有

生長(zhǎng)素合成酶/生長(zhǎng)素合成相關(guān)

生長(zhǎng)素合成酶/生長(zhǎng)素合成相關(guān)

基因。
（6）為了檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因是否成功，應(yīng)在

含

含

（填“含”或“不含”）物質(zhì)甲的培養(yǎng)液中將獲得的根進(jìn)行水培，發(fā)現(xiàn)只有部分能產(chǎn)生目標(biāo)次生代謝產(chǎn)物。部分根無(wú)法產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物的可能原因是

反接的基因A未成功表達(dá)

反接的基因A未成功表達(dá)

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