啤酒生產(chǎn)需經(jīng)過制麥、糖化、發(fā)酵等主要環(huán)節(jié)。糖化主要是將麥芽中的淀粉等有機(jī)物水解為小分子的過程。主要工藝流程如圖1所示，請(qǐng)回答下列問題：

（1）大麥?zhǔn)瞧【瓢l(fā)酵的重要碳源，針對(duì)制麥及糖化步驟，下列說法正確的有

②③

②③

（填序號(hào)）。
①大麥萌發(fā)時(shí)僅產(chǎn)生淀粉酶，幾乎不產(chǎn)生蛋白酶
②用赤霉素處理大麥，可誘導(dǎo)淀粉酶的合成
③酵母不能直接利用淀粉，需要淀粉酶等將淀粉轉(zhuǎn)化成酵母可利用的糖
④糖化采用的溫度越高，淀粉水解速度越快
（2）啤酒發(fā)酵時(shí)具有活力的酵母需達(dá)到一定的數(shù)量，故在菌種活化的過程中，需定時(shí)取樣，檢測(cè)酵母的生長(zhǎng)狀況。若某次樣品經(jīng)2次10倍稀釋后，經(jīng)臺(tái)盼藍(lán)染色（體積不計(jì)），在25×16型血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)

無

無

色細(xì)胞，5個(gè)中格中的細(xì)胞數(shù)為244個(gè)，該樣品中活酵母細(xì)胞的密度為

1.22×10⁹

1.22×10⁹

個(gè)細(xì)胞/mL。
（3）敲除釀酒酵母中的蛋白酶基因，減少發(fā)酵液中蛋白的水解，有助于增強(qiáng)啤酒泡沫的穩(wěn)定性，從而改善啤酒的品質(zhì)。以下是某科研小組的實(shí)驗(yàn)：
①已知編碼酵母蛋白酶A（PEP4）的基因序列如圖2為非模板鏈）：
編碼該酶的mRNA，起始端的三個(gè)密碼子依次為

AUG、UUC、AGC

AUG、UUC、AGC

，終止密碼子為

UGA

UGA

。
②Cas9蛋白可在人為設(shè)定的RNA序列（gRNA）引導(dǎo)下，在選定位點(diǎn)切斷相應(yīng)的DNA鏈（如圖3，在DNA自我連接的修復(fù)過程中產(chǎn)生突變。DNA序列中含NGG的位點(diǎn)具有較高的編輯效率（N為任意堿基）。上述PEP4序列虛線框中有

5

5

處可作為Cas9的優(yōu)選剪切位點(diǎn)。Cas9的剪切位點(diǎn)在其NGG識(shí)別位點(diǎn)的

3'

3'

側(cè)。（填“5“”或“3'”）
③用酪蛋白固體培養(yǎng)基篩選突變體，野生型可以水解酪蛋白，在菌落周圍形成透明圈。需要篩選透明圈

小

小

的菌落，表明其蛋白酶活性

弱

弱

。